ApaLI內切酶

ApaLI內切酶（ApaLI restriction enzyme）是一種常用的限制性內切酶，屬于Ⅱ型內切酶家族。ApaLI內切酶能夠識別并切割DNA中特定的核苷酸序列，具有特定的切割位置和特異性。本文將對ApaLI內切酶的基本特性、作用機制、應用領域等方面進行詳細介紹。

ApaLI內切酶 的基本特性：

ApaLI內切酶主要識別并切割DNA中的5'-GTGCAC-3'序列，切位為該序列的ApaLI酶切位點。該酶切位點的特異性使ApaLI內切酶在DNA分子中具有高度特異性，能夠精確切割含有特定序列的DNA片段。ApaLI內切酶的活性受到環境因素（如pH值、離子濃度等）的影響，因此在實驗操作中需要注意調節適宜的反應條件。

ApaLI內切酶的作用機制：

ApaLI內切酶是一種雙鏈DNA內切酶，通過識別特定的核苷酸序列，在該序列的特定位置引發DNA鏈的切割反應。ApaLI內切酶在酶切位點周圍與DNA分子形成復合物，通過水解作用將DNA鏈切斷，產生兩個具有粘性末端的DNA片段。這些粘性末端可用于DNA片段的連接、重組等進一步實驗操作。

ApaLI內切酶的應用領域：

ApaLI內切酶在分子生物學領域廣泛應用于DNA片段的切割、重組、連接等實驗操作中。通過ApaLI內切酶的作用，可以在DNA分子中特異性地切割出含有目標序列的片段，進而進行進一步的DNA克隆、測序、PCR等實驗操作。ApaLI內切酶還常用于構建重組質粒、定向基因突變等研究領域，為研究人員提供了強大的工具和手段。

LightNing® 快速內切酶是一系列經過基因工程重組的快速限制性內切酶，適用于質粒 DNA、PCR 產物或基因組 DNA 等的快速酶切。所有 LightNing® 快速內切酶在通用的 CutOne® 或 CutOne® Color Buffer 中都具有優良的活性，能夠在 5~15 分鐘內完成酶切。此外，百時美去磷酸化、連接試劑在 CutOne® Buffer 中均具有 100% 活性，支持一管化反應，提升“酶切 - 修飾 - 連接”的體驗。

CutOne® Color Buffer包括紅色和黃色示蹤染料，可將產物直接用于凝膠電泳。CutOne® Color Buffer 的紅色染料與 2500 bp 雙鏈 DNA 片段在 1% 瓊脂糖凝膠中遷移速率接近；黃色染料與 10 bp 雙鏈 DNA 片段在 1% 瓊脂糖凝膠中遷移速率接近。

特性和用法

ApaLI 內切酶可以快速內切酶，可在5~15 min內完成反應

建議反應條件

1× CutOne®緩沖液；

37℃溫育；

參照“DNA 快速酶切流程”配制反應體系。

失活條件

80℃溫育20 min。

甲基化敏感性

對于被 CpG 甲基化的 DNA，剪切可能受阻，對于被 EcoKI 甲基化的 DNA，剪切可能受阻。

產品組成