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青島捷世康生物科技有限公司
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木質素(Lignin )含量試劑盒說明書

時間:2020/9/28閱讀:1847
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微量法

注意:正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義

木質素是構成植物細胞壁的成分之一,是由聚合的芳香醇構成的一類物質,存在于木質組織中,主要作用是通過形成交織網來硬化細胞壁。木質素主要位于纖維素纖維之間,起抗壓作用。

測定原理

木質素中的酚羥基發生乙酰化后在 280nm 處有特征吸收峰,280nm 的吸光值高低與木質素含量正相關。

需自備的儀器和用品

天平、40 目篩,玻璃試管、燒杯、離心機,恒溫水浴鍋、烘箱、封口膜、紫外分光光度計、1mL 石英比色皿、高氯酸。

試劑組成和配制

試劑一:液體 50mL×2 瓶,4℃保存。

試劑二:液體 100mL×1 瓶,4℃保存。

試劑三:液體 100mL×2 瓶,4℃保存。

樣品處理

樣品 80℃烘干至恒重,粉碎,過 40 目篩,稱取約 5mg(記為 W)于 10mL 玻璃試管中(務*玻璃試管,不可用 Ep 管)

測定操作表

 

空白管

測定管

樣本(mg)

 

5

試劑一(μL)

1000

1000

高氯酸(μL)

40

40

于 10mL 玻璃試管中,用封口膜密封,充分混勻,80℃水浴 40min,每隔 10min 震蕩一次,然后自然冷卻

試劑二(μL)

1000

1000

充分混勻

上清(μL)

40

40

試劑三(μL)

1960(參照注意事項四)

1960(參照注意事項四)

200ul 于微量石英比色皿或者96孔板,測定 280nm處吸光值 A。分別記為 A 空白管和 A 測定管,ΔA=A 測定管-A 空白管

計算公式

用微量石英比色皿計算公式如下:

標準曲線:y = 0.02776x+0.0068,R2 =0.9889

Lignin(mg/g 干重)= (ΔA-0.0068)÷0.02776×V 反總×10 -3 ÷W×T

=0.0735×(ΔA-0.0068) ÷W×T

V 反總:反應總體積:2.04mL;W:樣本質量,g;T:稀釋倍數

96 孔板計算公式如下:

標準曲線:y = 0.01388x+0.0034,R2 =0.9889

Lignin(mg/g 干重)= (ΔA-0.0034)÷0.01388×V 反總×10 -3 ÷W×T

=0.1470×(ΔA-0.0034) ÷W×T

V 反總:反應總體積:2.04mL;W:樣本質量,g;T:稀釋倍數

注意事項

1. 試劑一有毒性,請操作時做好防護措施,加熱前必須用封口膜密封,以防氣體溢出。

2. 加熱過程中有劇烈反應,震蕩時輕搖,以免壓力過大噴出造成人傷害。

3. 試劑三具有強刺激性,建議操作過程全部在通風櫥子操作。

4. 取上清加試劑三步驟根據自己樣品乙?;潭龋噭┤挠昧靠烧{整,保證吸光值在0.1-0.8之間即可,并在公式中參與計算。

5.乙酰化測定木質素含量如受到實驗環境的影響,可自行制作標準曲線。

 

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