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紅四氮唑溶液(2%)

時間:2020/10/26閱讀:1996
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    2,3,5-三苯基氯化四氮唑(2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride,TTC),分子量為334.80,分子式為 C19H15ClN4,CAS 號為 298-96-4TTC 是脂溶性光敏感復合物,初用于檢測種子生存能力,后來用于染色檢測哺乳動物組織的缺血梗塞。TTC 是呼吸鏈中吡啶核苷結合酶系統的質子受體,TTC 與正常組織中的呼吸酶反應而呈紅色,而缺血組織內呼吸酶活性下降,不能反應,故不會產生變化呈蒼白色,該染色是一種用于評價組織內脫氫酶活性的大體染色方法。

    紅四氮唑溶液(2%)對心肌梗死及腦組織壞死區的觀測較電鏡早 3~6h,較光鏡24h,多用于尸檢中的新鮮心臟組織和腦組織以及實驗動物模型早期梗死組織的染色。其特點:①TTC 染色直接取材于新鮮組織即可染色,無需固定、包埋等步驟;②TTC 染色時間短,一般 20~30min;③紅四氮唑溶液(2%)可重復使用,10ml 可染 20 張片子。

自備材料:

1、生理鹽水

2、低溫冰箱

3、4%多聚甲醛或 10%中性福爾馬林

操作步驟(僅供參考)

(一)腦組織染色

1、取待檢新鮮腦組織樣本(一般可麻醉后直接取腦或經生理鹽水灌注后取腦),取出后-20℃速凍 20~30min,便于切片。

 2、將待檢腦組織切片,一般動物樣本層厚 2~3mm,人的樣本層厚 3~5mm,可連續切4~5 張。刀在腦前極與視交叉連線中點處;第二刀在視交叉部位;第三刀在漏斗柄部位;第四刀在漏斗柄與后葉尾極之間(參考:張均田主編,現代藥理試驗方法)。

3、切片入 紅四氮唑溶液(2%),避光浸染 30~35min。

4、切片入 4%多聚甲醛或 10%中性福爾馬林中固定 4~24h。

5、吸干組織表面清水,應用 IPP 等圖像分析系統測量腦梗死面積并計算大腦梗死體積。

(二)種子染色

1、取不同活力的種子用刀片做橫切和沿種胚中央準確縱切,取每粒種子的一半備用。

2、將上述種子置于 紅四氮唑溶液(2%)中,37℃避光孵育 20min。

3、倒出染色液,自來水沖洗 2-3 次,立即觀察種胚著色的情況。

 染色結果:

                

 

注意事項:

1、 紅四氮唑溶液(2%)對人體有輕微刺激性,請注意小心防護。

2、取腦時應仔細保持大腦的完整性。

3、如果染色效果不佳,應適當延長染色時間。

4、樣本越新鮮越好,為了防止正常心肌及腦組織的酶活性減弱或消失,應盡快染色。

5、為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

6、僅供科研實驗使用;不得用于臨床診斷等用途。

 

 

有效期: 6 月有效。

 

 

 

 

 

 

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