賴氨酸(lysine，Lys)含量測定試劑盒說明書
微量法100管/96樣
注 意：正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義：
賴氨酸是人體必需氨基酸之一，能促進人體發育、增強免疫功能，并有提高中樞神經組織功能的作用。賴氨酸為堿性必需氨基酸。由于谷物食品中的賴氨酸含量甚低，且在加工過程中易被破壞而缺乏，故稱為第一限制性氨基酸。
測定原理：
蛋白質中的賴氨酸具有一個游離的ε-NH2，它與茚三酮試劑反應生成藍紫色物質，其顏色的深淺在一定范圍內與賴氨酸的含量成線性關系。亮氨酸與賴氨酸的碳原子數目相同，而且僅有—個游離氨基(ε-NH2)，所以通常用亮氨酸配制標準液。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰、蒸餾水、水浴鍋。
試劑的組成和配制：
提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：粉劑×1瓶，4℃保存；臨用前加入12.5mL試劑三充分溶解混勻；
試劑二：液體12.5mL×1瓶，4℃保存；
試劑三：液體15mL×1瓶，4℃保存；
試劑四：60%乙醇，自備。
賴氨酸提?。?/span>
樣本烘干粉碎，稱取約0.01g樣本，加入1mL提取液，充分勻漿。80℃水浴提取20min，冷卻后10000g離心10min，取上清待測。
測定步驟：
1、 分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調節波長至570nm，蒸餾水調零。
2、 工作液的配制：取10mL試劑一與10mL試劑二混合搖勻，取上清備用。用不完的試劑4℃保存。
3、 在有蓋EP管中加入下列試劑：
試劑名稱（μL） | 測定管 | 空白管 |
樣本 | 100 | |
提取液 | 100 | |
工作液 | 200 | 200 |
混勻，80℃水浴30min（蓋緊，以防止水分散失），冷卻至常溫。
試劑四 | 300 | 300 |
混勻，取200μL至微量石英比色皿或96孔板中，于530nm波長處記錄吸光值A。△A=A測定管-A空白管。
空白管只要做一管。
賴氨酸含量計算：
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準條件下測定回歸方程為y = 0.0062x - 0.0212；x為賴氨酸含量（µg/mL），y為吸光值。
1.按照蛋白濃度計算
賴氨酸含量(µg/mg prot)=[(△A +0.0212)÷0.0062×V1]÷(Cpr ×V1)×1.1515
=185.73×(△A+0.0212) ÷Cpr
2.按照樣本質量計算
賴氨酸含量(µg/g干重)=[(△A +0.0212)÷0.0062×V1]÷(W ×V1÷V2)×1.1515
=185.73×(△A+0.0212) ÷W
V1：加入反應體系中樣本體積，0.1mL；V2：加入提取液體積，1 mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；1.1515，校正系數。
b.用96孔板測定的計算公式如下
標準條件下測定回歸方程為y = 0.0031x - 0.0212；x為賴氨酸含量（µg/mL），y為吸光值。
1.按照蛋白濃度計算
賴氨酸含量(µg/mg prot)=[(△A +0.0212)÷0.0031×V1]÷(Cpr ×V1)×1.1515
=371.45×(△A+0.0212) ÷Cpr
2.按照樣本質量計算
賴氨酸含量(µg/g干重)= [(△A +0.0212)÷0.0031×V1]÷(W ×V1÷V2)×1.1515
=371.45×(△A+0.0212) ÷W
V1：加入反應體系中樣本體積，0.1mL；V2：加入提取液體積，1 mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；1.1515，校正系數。
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