土壤漆酶（Soil Laccase，SL）試劑盒說明書
微量法 100T/48S
注 意 ：正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義：
漆酶（Laccase）是一種含銅的多酚氧化酶，屬于銅藍氧化酶家族，廣泛分布于真菌和高等植物中，具有較強的氧化還原能力，在紙漿生物漂白，環境污染物降解和木質纖維素降解以及生物檢測方面有非常廣泛的應用。
測定原理：
漆酶分解底物 ABTS 產生 ABTS 自由基，在 420nm 處的吸光系數遠大于底物 ABTS，測定
ABTS 自由基的增加速率，可計算得漆酶活性。
自備實驗用品及儀器：
天平、低溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔板、震蕩儀。
試劑組成和配制：
試劑一：液體 40mL×1 瓶，4℃保存。
工作液：粉劑×2 瓶，4℃避光保存，臨用前每瓶加 10mL 試劑一溶解。
樣品處理：
新鮮土樣風干，過 30-50 目篩。
測定操作：
1. 可見分光光度計/酶標儀預熱 30min，調節波長到 420nm，蒸餾水調零。
對照管 | 測定管 | |
樣本（g） | 0.02 | 0.02 |
試劑一（μL） | 250 | |
工作液（μL） | 250 | |
37℃震蕩反應 10min，冰浴 5min，10000g，4℃離心 5min，分別取上清 200μL 于 420nm 處 測定吸光值，記為記為 A 對照和 A 測定。△A=A 測定-A 對照 | ||
酶活性計算公式：
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
酶活性定義：每克土壤每分鐘氧化 1nmol 底物 ABTS 所需的酶量為一個酶活力單位（U）。
?A
SL 活性（nmol/min /g 土樣）= ? ? d ×V 反總÷W÷T= 0.694×△ A÷W
ε：ABTS 毫摩爾消光系數：36L/mmol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V 反總：反應總體積，
0.25mL；W：樣本質量，g；T：反應時間，10min
b.用 96 孔板測定的計算公式如下
酶活性定義：每克土壤每分鐘氧化 1nmol 底物 ABTS 所需的酶量為一個酶活力單位（U）。
?A
SL 活性（nmol/min /g 土樣）= ? ? d ×V 反總÷W÷T= 1.388×△ A÷W
ε：ABTS 毫摩爾消光系數：36L/mmol/cm；d：比色皿光徑，0.5cm；V 反總：反應總體積，
0.25mL；W：樣本質量，g；T：反應時間，10min
注意事項：
1. 工作液需臨用前配制，并且盡快使用，4℃保存一周，若變色則不能使用。
2. 測定之前進行預實驗，若吸光值較高，請將樣品用提取液進行適當的稀釋再測定，并在計算公式中乘以稀釋倍數。
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