土壤全硼試劑盒說明書
微量法100T/96S
注 意 ：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義：
硼是植物生長發育必需的七種微量營養元素之一，土壤中硼素的含量高低直接影響著植物的生長狀況。
測定原理：
硼與甲亞胺在弱酸條件下形成棕黃色配合物，在420nm有特征吸收峰。
自備實驗用品及儀器：
天平、常溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、馬弗爐、微量石英比色皿/96孔板。
試劑組成和配制：
提取劑：粉劑×1瓶，4℃保存。
提取液：液體100mL×4瓶，4℃保存。
試劑一：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加8mL水溶解，加0.125mL乙酸。
試劑二：粉劑×1瓶，4℃避光保存。臨用前加4mL蒸餾水溶解。
樣本處理：
新鮮土樣風干，過100目篩，按照土壤質量（g）：提取劑質量(g)為1：4的比例（建議稱取約0.1g土樣，加入0.4g提取劑）緩慢加入提取劑于坩堝中，邊加邊攪拌均勻，然后在馬弗爐中550℃熔融10min，然后在920℃熔融30min，趁熱取出坩堝，將熔融物轉入燒杯，邊攪拌邊加4mL提取液，必要時加蓋，防止溶液濺出，溶解30min后，5000g ，25℃離心10min，取上清液待測。
測定操作表：
空白管 | 測定管 | |
樣本（μL） | 40 | |
試劑一（μL） | 80 | 80 |
試劑二（μL） | 40 | 40 |
H2O（μL） | 80 | 40 |
充分混勻，25℃黑暗中靜置1h | ||
于微量石英比色皿/96孔板，蒸餾水調零，測定420nm處吸光值A，分別記為A空白管和A測定管，△A=A測定管-A空白管 | ||
計算公式：
a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準曲線：y = 0.3897x - 0.2359，R2 = 0.9995
全硼含量（mg/kg）=（△A+0.2359）÷ 0.3897×V反總÷（W×V樣÷V樣總）
= 51.32×（△A+0.2359）÷W
V反總：反應總體積，0.2mL；V樣：反應體系中加入樣本體積，0.04mL；V樣總：加入提取液體積，4mL，W：樣本質量，g
a. 用96孔板測定的計算公式如下
標準曲線：y = 0.1949x - 0.2359，R2 = 0.9995
全硼含量（mg/kg）=（△A+0.2359）÷ 0.1949×V反總÷（W×V樣÷V樣總）
=102.64×（△A+0.2359）÷W
V反總：反應總體積，0.2mL；V樣：反應體系中加入樣本體積，0.04mL；V樣總：加入提取液體積，4mL，W：樣本質量，g
注意事項：
1. 配制好的試劑二4℃保存不可超過7天。
2. 顯色時嚴格控制溫度并且避光，以免顯色劑見光分解。
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