土壤纖維素酶（Solid-cellulase，S-CL）活性測定試劑盒說明書
微量法100管/48樣
注 意 ：正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義：
S-CL主要來源于土壤微生物，S-CL催化農(nóng)作物秸稈產(chǎn)生的葡萄糖是主要的碳源營養(yǎng)物質(zhì)。
測定原理：
采用蒽酮比色法測定S-CL催化纖維素降解產(chǎn)生的還原糖的含量。
需自備的儀器和用品：
酶標(biāo)儀/可見分光光度計、水浴鍋、可調(diào)式移液器、96孔板/微量石英比色皿、甲苯、硫酸（不允許快遞）和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
試劑一：甲苯10mL×1瓶，4℃保存；（自備）
試劑二：液體6mL×1瓶，4℃保存；
試劑三：液體40mL×1瓶，4℃保存；
試劑四：粉劑×1瓶，4℃保存； 臨用前加入5mL蒸餾水和45mL濃硫酸充分溶解待用。
樣品處理：
新鮮土樣自然風(fēng)干或37度烘箱風(fēng)干，過30~50目篩。
加樣表和測定步驟：
對照管 | 測定管 | |
風(fēng)干土樣（g） | 0.05 | 0.05 |
試劑一 (μL) | 50 | 50 |
振蕩混勻15min | ||
試劑二（μL ） | 90 | |
試劑三（μL ） | 370 | 370 |
蒸餾水（μL ） | 180 | 90 |
37℃振蕩反應(yīng)3h后，90℃水浴15min（蓋緊，防止水分散失），冷卻后
8000g 25℃離心10min，取上清，得糖化液
糖化液 (μL) | 140 | 140 |
試劑四 (μL) | 260 | 260 |
混勻， 90℃水浴10min（蓋緊，防止水分散失），冷卻，取200μL至微量石英比色皿或96孔板中，測620nm下吸光值A，計算ΔA=A測定管-A對照管。每個測定管設(shè)一個對照管。
S-CL活力計算：
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y = 5.018x - 0.0462；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y為吸光值。
單位的定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1mg 葡萄糖定義為一個酶活力單位。
S-CL活力（mg/d/g）＝(ΔA+0.0462) ÷5.018×V反總÷W÷T =19.1×(ΔA+0.0462)
T：反應(yīng)時間，3h=1/8d； V反總：反應(yīng)體系總體積：0.6mL；W：樣本質(zhì)量，0.05g。
b.用96孔板測定的計算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y = 2.5090x - 0.0462；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y為吸光值。
單位的定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1mg 葡萄糖定義為一個酶活力單位。
S-CL活力（mg/d/g）＝(ΔA+0.0462) ÷2.5090×V反總÷W÷T =38.3×(ΔA+0.0462)
T：反應(yīng)時間，3h=1/8d； V反總：反應(yīng)體系總體積：0.6mL；W：樣本質(zhì)量，0.05g。
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優(yōu)利科（上海）生命科學(xué)有限公司 | 下載次數(shù) |
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WORD 文檔 |
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