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PCR/qPCR耗材選擇——一般特征篇

閱讀:1402      發布時間:2023-2-13
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1)規格

常見的PCR/qPCR耗材規格如下

管:0.5 mL, 0.2 mL, 0.1 mL

96 孔板:0.2 mL, 0.1 mL

384 孔板:0.02 mL

PCR/qPCR/板的規格決定了反應體積如果加入過多的樣品,一方面會導致熱傳導的效率下降,另一方面會導致樣品溢出或者污染;如果加入的樣品過少,又會因為頻繁的熱循環導致水分蒸發,進而導致體系不足、樣品損耗,實驗出現誤差或者無結果。并且選用的耗材需根據PCR儀的加熱模塊來決定,以求最DA程度的熱傳導的匹配。

2)高度

PCR/qPCR/板有不同高度的選擇,其中“低容(low profile"的管/板意思是說,與普通的管/板相比,它們的高度更低,這樣的設計能最大成大的減少反應體系上方的空間,減少了蒸發對體系的影響,并且提高了熱傳導的效率。因此更推薦優先使用低容的管/板。

3厚度

PCR/qPCR/板要求管壁厚度的一致性,可以保證熱傳導的一致性。除標準厚度外,目前超薄壁的耗材也受到了廣泛的應用,這種超薄壁的管/板管壁厚度約是標準版的50%,可以進一步減少熱障,使熱傳遞進行更快,PCR反應更加穩定。

4透明度

對于普通PCR來說,管材的透明度對擴增結果無影響。對于qPCR來說,管身應選擇不透明的白色或者磨砂質地的,而管蓋或者密封膜則要求具有高度的光學透性,以保證熒光信號傳遞最佳,并且降低反應中的失真


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