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ELISA檢測(cè)時(shí)樣本實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備步驟有什么?

閱讀:870      發(fā)布時(shí)間:2023-11-27
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在收集樣本前都必須有一個(gè)完整的計(jì)劃,必須清楚要檢測(cè)的成份是否足夠穩(wěn)定。那么你知道ELISA檢測(cè)時(shí)樣本實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備步驟都有什么嗎?讓我們一起來看看吧!

1. 血清

室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

2. 血漿

應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

3. 尿液

用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。

4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清

 檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。

5. 培養(yǎng)細(xì)胞

檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBSPH72-74)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

6. 組織標(biāo)本

切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBSPH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBSPH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。

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