INS-1細(xì)胞訂購基本信息：

細(xì)胞名稱：INS-1-GFP大鼠胰島綠色標(biāo)記細(xì)胞 培養(yǎng)步驟 含STR鑒定

細(xì)胞別名

產(chǎn)品價(jià)格

INS-1細(xì)胞

大鼠胰島細(xì)胞瘤細(xì)胞

以為準(zhǔn)

細(xì)胞特性
1）來源：大鼠移植胰島瘤

2）形態(tài)：貼壁生長

3）含量：>1x106 個(gè)/mL

4）污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性

5）規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
INS-1細(xì)胞培養(yǎng)的一般過程：
一、準(zhǔn)備工作
1.器皿的清潔、干燥和消毒；
2.培養(yǎng)基與其他試劑的配制、分裝及滅菌；
3.無菌室或超凈臺(tái)的清潔與消毒；
4.培養(yǎng)箱及其他儀器的檢查與調(diào)試等等。
二、取材
在無菌環(huán)境下從機(jī)體取出某種組織細(xì)胞。理論上各種動(dòng)物和人體組織都可用于培養(yǎng)，但幼體組織尤其是胚胎組織更易培養(yǎng)。取材時(shí)應(yīng)在無菌環(huán)境下盡快處理并培養(yǎng)。
三、培養(yǎng)
1.組織塊培養(yǎng)，直接放置于器皿底部，幾個(gè)小時(shí)后再加入培養(yǎng)基；細(xì)胞系培養(yǎng)，先行計(jì)數(shù)，按一定量接入器皿并直接加入培養(yǎng)基。細(xì)胞進(jìn)入培養(yǎng)器皿后立即放入培養(yǎng)箱中，使細(xì)胞今早進(jìn)入生長狀態(tài)。
2.每隔一定時(shí)間觀察細(xì)胞生長狀況、形態(tài)、有無污染、PH值以及二氧化碳濃度等等。
3.原代細(xì)胞一般有一段潛伏期，潛伏期內(nèi)細(xì)胞不分裂，但可貼壁或游走。過了潛伏期細(xì)胞便進(jìn)入分裂期。細(xì)胞長滿平底之后要代傳培養(yǎng)。
四、凍存及復(fù)蘇

INS-1-GFP大鼠胰島綠色標(biāo)記細(xì)胞 培養(yǎng)步驟 含STR鑒定

一般采用-196℃的液氮凍存，凍存管中加入含有保護(hù)劑的培養(yǎng)基。復(fù)蘇即從液氮中取出凍存管后，立即放入37℃的水中迅速融解，然后將INS-1細(xì)胞轉(zhuǎn)入培養(yǎng)器皿中進(jìn)行培養(yǎng)。
7.熒光素表達(dá)鑒定: 重組質(zhì)粒pSin-hyg-GFP/luc2（以下簡稱Gluc）轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞：DNA定量后，使用PEI轉(zhuǎn)染Gluc至24孔板已預(yù)鋪的293T細(xì)胞中。轉(zhuǎn)染采用脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染，試劑采用JetPEI (Polyplus公司)。兩管EP管中分別加入50ul生理鹽水，其中一管加入1ug量的質(zhì)粒（DNA體積=1ug/DNA濃度），輕輕震蕩混勻，再輕微離心；在另一管中加入PEI 2ul輕輕震蕩混勻，輕微離心，然后把PEI管中的溶液加入含有的質(zhì)粒管中，室溫孵育20min。將脂質(zhì)體包繞DNA的混合液加入需要轉(zhuǎn)染的24孔內(nèi)，37 ℃、5 % CO2條件下培養(yǎng)，8小時(shí)后換培養(yǎng)液。

8.報(bào)告基因檢測(cè)：Passive Lysis Agent裂解細(xì)胞，加入熒光素酶作用底物，將轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的細(xì)胞與陰性，陽性對(duì)照共同進(jìn)行單報(bào)告基因檢測(cè)。

9.質(zhì)粒中抽：取1ml轉(zhuǎn)染報(bào)告基因檢測(cè)正確的菌液加入100ml氨芐抗性的LB培養(yǎng)基中搖菌過夜，使用Invitrogen試劑盒中抽，產(chǎn)物電泳鑒定，－20℃保存。