蛋白質定氮儀

1. 儀器安裝：

將配件中的硅膠管根據實際需求剪成不同的長度，按照上面左側示意圖連接好（注意接緊，防止漏水）。蒸餾水進口和堿液進口的硅膠管另一端必須浸泡在所對應的液面以下。蒸餾水出口和冷卻水出口的硅膠管另一端放入排水池（桶）。冷卻水進口連接自來水龍頭。在儀器正面左側托盤上安放空的消化管，右側放錐形瓶，插入帶橡皮塞的玻璃嘴。

2. 儀器檢測：

⑴．打開冷卻水（水龍頭開關），注意流量，控制在3-4L/分鐘。接上電源線，打開電源總開關。儀器開始自動加水，從側面燒杯水位觀測口可以看見燒杯內的水位上升，一段時間后會自動停止加水（由系統內水位探針自動控制，水位不足會持續加水）。

⑵．打開加堿按鈕，加堿量大概在30mL左右時，關閉加堿按鈕.接著打開蒸餾按鈕，儀器開始蒸餾。儀器工作10分鐘左右（錐形瓶內液體在100-150mL左右），關閉蒸餾按鈕（燈熄滅），儀器停止蒸餾，整機檢測完成。

3. 實驗蒸餾：

在消化管托盤上換上已消化完成并冷卻稀釋后(一般加20ml蒸餾水稀釋)的樣品，右側換成準備好的錐形瓶（錐形瓶內加入50ml硼酸和4-5滴混合指示劑，具體硼酸量由各自實驗情況確定），調整氨氣回流玻璃嘴和瓶塞，使玻璃嘴浸泡在硼酸液面以下。

然后先打開加堿按鈕，加到自己所需要的堿的用量后（確保液體顏色變黑為止），關閉加堿按鈕。然后再打開蒸餾按鈕。

蒸餾即將完成時（一般蒸餾時間8-12分鐘左右，錐形瓶內液體在150-200ml左右），提起橡皮塞，移開錐形瓶，使氨氣回流玻璃嘴離開液面，用蒸餾水沖洗玻璃嘴外壁，繼續蒸餾10秒鐘后，關閉蒸餾按鈕，取下錐形瓶待滴定用。

注意：更換樣品蒸餾時不需要關閉電源總開關。

4．滴定/計算（以下數據僅供參考，以本行業標準為主）

用0.05mol/LHCL滴定接收瓶內的溶液，滴定至（暗）灰色時為止，記下消耗HCL的毫升數，按下列式子計算蛋白含量：

蛋白質%＝

式中： V₁—樣品消耗硫酸或鹽酸標準液的體積，ml；

     V₂—試劑空白消耗硫酸或鹽酸標準液的體積，ml；

     N—硫酸或鹽酸標準溶液當量濃度；

     0.014—1N硫酸或鹽酸標準溶液1ml相當于氮克數；

     m—樣品的質量（體積），g（ml）；

        F—蛋白質系數，按16%計算乘以6.25即為蛋白質。

       (空白測定：用0.1克糖代替樣品或不加樣品作空白測定)

5. 清洗/關機

先換上空的消化管和錐形瓶，把連堿進口的硅膠管換成新的一個硅膠管，另一端放入蒸餾水容器內，然后按蒸餾按鈕，用蒸餾水清洗堿泵，一般30秒鐘左右后取下堿進硅膠管，排空堿路里面的液體。

然后關閉冷卻水（自來水龍頭），打開蒸餾水排水開關，排完蒸餾水。最后關閉總電源開關，拔掉電源線。（最后一天實驗做完后必須進行關機清洗操作）。

蛋白質定氮儀

試劑/樣品準備

1. 儀器和工具

a.分析天平：感量0.0001g

b.酸式滴定管：25ml或10ml

c. 錐形瓶:容積250ml

d. 消化管：300ml（消化爐標配中有）

2.試劑

a． NaOH溶液：化學純，按標注方法配制成40%濃度水溶液（m/v）

b．硼酸（H₃BO₃）：分析純，按標注方法配制成2%濃度水溶液（m/v）

c. 鹽酸（HCL）：分析純，0.05mol/L標準液，用碳酸鈉法標定鹽酸

d．混合指示劑：甲基紅（G₅H₅N₃O₂）溶于乙醇配成0.1%乙醇溶液，溴甲酚綠溶于乙醇配成0.5%乙醇溶液，二種溶液等體積混合陰涼處保存（保存期三個月）。

3.樣品

將消化爐消化完成并且冷卻后的樣品稀釋后進行實驗。（消化取樣注意：稱取0.20g～2.00g固體試樣或2.00g～5.00g半固體試樣或吸取10.00ml～25.00ml液體試樣（約相當氮30mg～40mg），進行消化。）