BD Stain Buffer染色緩沖液FBS  554656，BD Pharmingen™ Stain Buffer (FBS)

染色緩沖液（Stain Buffer, FBS）使用說明

適用范圍
本染色緩沖液（含胎牛血清，FBS）適用于以下樣本的單細胞懸液免疫熒光染色：

• 淋巴組織

• 骨髓

• 外周血

• 培養細胞

主要功能

1. 熒光試劑的稀釋與孵育

2. 流式檢測細胞的懸浮、洗滌及短期保存

配方特性

• 以中性pH（7.4）緩沖鹽溶液（DPBS）為基礎

• 添加熱滅活（56°C，30分鐘）胎牛血清（FBS）蛋白

• 含代謝抑制劑NaN?

核心優勢
? 維持細胞活力
? 優化pH敏感熒光染料信號（如FITC）
? 抑制抗原修飾：通過NaN?阻斷抗體交聯導致的細胞表面抗原脫落或內化
? 信號穩定性：配合低溫環境可防止免疫熒光染色信號衰減

推薦實驗流程：流式細胞術（直接免疫熒光染色法）

已驗證方案

1. 樣本制備

• 從以下樣本制備單細胞懸液（標準操作）：
  ? 淋巴組織
  ? 骨髓
  ? 外周血
  ? 培養細胞

2. 細胞洗滌

• 用預冷 Stain Buffer (FBS) 洗滌細胞兩次

• 離心沉淀細胞（300 × g，4°C）

• 重懸細胞至終濃度 2 × 10? 個細胞/ml（使用預冷緩沖液）

3. 分裝細胞

• 每份分裝 50 µl 細胞懸液（含 1 × 10? 個細胞）至：
  ? 流式管
  ? 微孔板圓底孔

4. 抗體孵育

• 用 Stain Buffer (FBS) 稀釋熒光抗體至最佳工作濃度

• 加入 10 µl 稀釋抗體 至細胞懸液

• 冰上避光孵育 20 分鐘（低親和力抗體可延長至 ≥45 分鐘）

5. 洗滌未結合抗體

• 按容器選擇洗滌體積：
  ? 微孔板：200 µl/孔
  ? 流式管：1 ml/管

• 離心（300 × g，5 分鐘）

• 小心吸棄上清（微孔板/流式管）或倒置吸干（流式管）

6. 重懸細胞

• 按容器選擇重懸體積：
  ? 微孔板：200 µl
  ? 流式管：0.5 ml

• 若使用微孔板，轉移細胞至流式管并調整終體積至 ~0.5 ml

7. 流式檢測

• 建議染色后 4 小時內上機檢測

• 若需延遲：
  ? 用緩沖多聚甲醛固定（如 BD Cytofix™, Cat. No. 554655）
  ? 4°C 避光保存
  ? 固定后建議 1 周內完成檢測

注意事項

1. 間接免疫熒光染色

• 若使用 未標記/生物su化一抗，需重復步驟 4-5

• 生物su化抗體檢測時，建議換用 無生物su的 Stain Buffer (BSA)（Cat. No. 554657）

2. 胞內抗原染色兼容性

• 本緩沖液適用于 表面抗原染色，后續可固定并進行胞內因子（如細胞因子）染色

• 染色后的細胞可暫存于 Stain Buffer (FBS)（4°C 避光），維持信號穩定性

BD Stain Buffer染色緩沖液FBS  554656，BD Pharmingen™ Stain Buffer (FBS)