不同蛋白質(zhì)定量方法的優(yōu)勢與局限性分析檢測技術服務詳情介紹

dànbáizhì定量是生命科學研究中的關鍵步驟，直接關系到生物學現(xiàn)象的揭示和疾病機制的理解。隨著質(zhì)譜技術和樣品處理流程的不斷發(fā)展，不同的dànbáizhì定量方法應運而生。

一、標記定量方法（Labeling-based Quantification）

標記定量方法通過在樣品處理過程中引入同位素或異位素標簽，實現(xiàn)多樣品間的相對定量或juéduì定量，代表性技術包括SILAC、iTRAQ和TMT。

1、SILAC（Stable Isotope Labeling by Amino Acids in Cell Culture）

??優(yōu)勢

SILAC通過細胞培養(yǎng)階段引入穩(wěn)定同位素標記，使得不同樣本來源的dànbáizhì在質(zhì)譜檢測中可以直接區(qū)分。由于標記發(fā)生在活細胞水平，zuì大程度避免了樣品處理引入的偏差，數(shù)據(jù)重復性jíhǎo，特別適合細胞模型中的動態(tài)變化研究。

??局限性

SILAC主要適用于能夠體外培養(yǎng)的細胞系，對組織樣本或臨床樣品則難以應用。同時，標記氨基酸的成本較高，且對實驗條件（如培養(yǎng)基成分）要求嚴格，限制了普適性。

2、iTRAQ（Isobaric Tags for Relative and Absolute Quantification）

??優(yōu)勢

iTRAQ技術可實現(xiàn)zuì多8到16個樣品的同時分析，極大提高了實驗通量和樣本對比的廣度。標記在肽段水平完成，不依賴生物體系來源，適用于組織、細胞、血清等多種樣本類型。

??局限性

iTRAQ存在"比值壓縮"現(xiàn)象（ratio compression），即高豐度肽段的共洗脫導致定量jīngquè度下降。此外，標記成本高昂，對儀器性能要求較高（如高分辨質(zhì)譜儀），對初學者友好度有限。

3、TMT（Tandem Mass Tags）

??優(yōu)勢

TMT作為一種異位素標記方法，與iTRAQ類似，但在信號檢測靈敏度和數(shù)據(jù)一致性方面有所優(yōu)化。新一代TMTpro可支持16重標記，適合大規(guī)模樣本隊列研究，如癌癥隊列樣本或多時間點動態(tài)追蹤。

??局限性

TMT同樣受限于比值壓縮問題，且數(shù)據(jù)解析需依賴特定軟件工具。此外，實驗設計需格外注意樣品平衡，以避免因通道效應產(chǎn)生假陽性或假陰性結果。

二、無標記定量方法（Label-free Quantification）

無標記定量依靠質(zhì)譜信號的強度（MS1）或譜圖計數(shù)（Spectral Counting）實現(xiàn)樣本間dànbáizhì豐度的比較，無需額外的化學修飾步驟。

1、基于峰面積的定量（Intensity-based Quantification）

??優(yōu)勢

峰面積定量方法依賴質(zhì)譜圖中肽段離子信號的積分，理論上靈敏度高，動態(tài)范圍廣，可jīngzhǔn捕捉低豐度蛋白的變化。適用于大規(guī)模、多批次樣本的長期追蹤研究。

??局限性

該方法對儀器穩(wěn)定性和樣品前處理一致性要求jígāo。不同批次間的系統(tǒng)誤差容易引入定量偏差，通常需要使用嚴格的QC樣品進行批間矯正。

2、譜圖計數(shù)法（Spectral Counting）

??優(yōu)勢

譜圖計數(shù)通過統(tǒng)計特定dànbáizhì對應的碎片譜數(shù)量推測其相對豐度，方法簡單直觀，不需要復雜的數(shù)據(jù)歸一化處理，適合粗篩選階段的大規(guī)模比較。

??局限性

譜圖計數(shù)靈敏度有限，尤其對低豐度蛋白不夠敏感，且定量準確性受限于肽段識別的重復性，通常需要結合其他定量策略加以驗證。

三、juéduì定量方法（Absolute Quantification）

juéduì定量方法旨在jīngquè測量目標dànbáizhì的juéduì拷貝數(shù)或濃度，常用于臨床生物標志物驗證或藥物靶點量化。

1、AQUA（Absolute Quantification）

??優(yōu)勢

AQUA利用含穩(wěn)定同位素標記的合成肽作為內(nèi)標，直接與目標肽段進行一對一比較，定量精度jígāo，可達亞皮摩爾（sub-pM）級別。特別適合需要高精度定量的生物標志物研究。

??局限性

AQUA需針對每一個待測蛋白合成特定內(nèi)標肽段，前期設計和合成成本高昂，且實驗流程較為復雜，對操作技術要求jígāo，不適合高通量初篩。

2、PSAQ（Protein Standard Absolute Quantification）

??優(yōu)勢

PSAQ方法使用完整dànbáizhì作為內(nèi)標，更好地模擬樣本中天然蛋白的消化效率，提高了整體定量的準確性，廣泛應用于復雜基質(zhì)如血漿、組織中的蛋白juéduì定量。

??局限性

PSAQ需要重組表達并純化完整dànbáizhì作為標準品，制備過程復雜且成本高，同時對于多目標蛋白的定量任務，實驗規(guī)模和成本都會成倍增加。

四、選擇不同dànbáizhì定量方法的策略考量

選擇合適的dànbáizhì定量方法需綜合考慮實驗目標、樣本類型、定量精度需求、預算成本以及實驗周期。

• 實驗目標：探索性研究更傾向選擇無標記定量；驗證性研究則推薦標記定量或juéduì定量。

• 樣本類型：細胞樣品適合SILAC，組織樣本則更適合TMT或無標記定量。

• 預算與設備條件：標記定量成本高但精度好，適合有gāoduān質(zhì)譜儀支撐的實驗室；資源受限條件下，可考慮優(yōu)化無標記定量流程。

隨著質(zhì)譜靈敏度和分辨率的持續(xù)提升，dànbáizhì定量方法正在向更高通量、更高精度、更強適應性的方向演進。不同dànbáizhì定量方法都具有其優(yōu)勢和局限性，科研人員需要根據(jù)實驗需求合理選擇技術策略。百泰派克生物科技始終關注dànbáizhì定量領域的技術前沿，致力于為生命科學研究者提供高質(zhì)量的定量蛋白組分析服務，助力科研探索更進一步。

百泰派克生物科技特色項目

一、蛋白測序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統(tǒng)對dànbáizhì序列進行分析，提供基于質(zhì)譜的蛋白測序分析服務，包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析，Nduāncèxù，Cduāncèxù和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務。對于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務，對蛋白序列進行分析。

※服務優(yōu)勢：

1.采用目前世界上優(yōu)良的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實現(xiàn)對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;

4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測;

6.測序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、dànbáizhì組學

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺結合Nano-LC，提供定量dànbáizhì組學、靶向dànbáizhì組學、多肽組學、翻譯后修飾蛋白組學等多種dànbáizhì組學分析服務。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學服務，助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫(yī)學及高通量修飾組學等研究工作。

※服務優(yōu)勢：

1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規(guī)模實驗分析，發(fā)現(xiàn)新的生物標記物;

2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標記方法，適用于分析組織、細胞、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高，實驗結果重復度高;

4.可檢測較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學分析，分析更系統(tǒng)準確。

三、單細胞質(zhì)譜流式技術分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進行單細胞質(zhì)譜流式技術分析，采用金屬元素標記物（通常是金屬元素標記的特異抗體）標記細胞表面和內(nèi)部的分子，然后用流式細胞原理分離單個細胞，再用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）分析單個細胞的原子質(zhì)量譜，zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細胞表面和內(nèi)部的信號分子表達量。

※服務優(yōu)勢：

1.技術優(yōu)良，*技術空白

采用金屬標記抗體技術，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問題。可在單細胞層面上對多種指標同時進行表征，百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白。

2.分析數(shù)量大，成本較低

單細胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個左右，而流式質(zhì)譜技術一次（單樣本）就可分析至少10^5的細胞，實現(xiàn)了數(shù)量級的提高，且成本不高于單細胞RNAseq。

3.應用前景大

①流式質(zhì)譜結果可以給出細胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標簽技術與其他技術結合會有新應用方向。除常規(guī)蛋白外，質(zhì)譜流式細胞技術還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測細胞存活率、細胞大小、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現(xiàn)10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學分析平臺進行免疫肽組學分析，可從zuì小的樣品材料中進行可重復的識別和定量。該服務可以應用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術，MALDI TOF，高效色譜分離技術，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結構分析，到產(chǎn)品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì)。

百泰派克生物科技七大檢測平臺

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質(zhì)譜多組學優(yōu)質(zhì)服務商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導原則，通過CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認證，建立了完備的質(zhì)量體系，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份，設備定期計量/期間核查，軟件審計追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術服務，支持新藥研發(fā)、藥物申報注冊和生產(chǎn)放行。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系，zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎的CRO檢測分析服務；

2.獲國家CNAS實驗室認可，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務；

3.業(yè)務范圍覆蓋dànbáizhì組學、多肽組學、代謝組學、生物藥物表征、單細胞分析、單細胞質(zhì)譜流式、生信云分析以及多組學生物質(zhì)譜整合分析等；

4.七大質(zhì)量控制檢測平臺，滿足您一站式服務需求；

5.服務3000+企業(yè)，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務!

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