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糖蛋白結構能否用圓二色性(CD)分析?適用性與局限全面解析檢測技術服務詳情介紹

糖蛋白廣泛分布于生命系統的多個層面,參與細胞識別、信號轉導、免疫調節等關鍵過程。其結構復雜性主要體現在糖鏈的多樣性和修飾位點的分布,這一特點也使得糖蛋白的結構研究具有相當高的挑戰性。在結構表征方法中,圓二色性(Circular Dichroism, CD)光譜因其快速、非破壞性和操作簡便的特點,被廣泛用于dànbáizhì的二級結構分析。


CD光譜簡述

CD光譜是基于手性分子對左右圓偏振光吸收差異的光譜技術。在蛋白研究中,遠紫外區CD(190–250nm)主要反映蛋白主鏈二級結構構象,例如α-螺旋和β-折疊。相比X射線晶體學、冷凍電鏡等高分辨率手段,CD具有實驗周期短、樣品需求少、分析環境接近天然狀態等優勢,適用于快速評估構象變化與熱穩定性。然而,CD光譜本質上反映的是整分子平均結構信息,信號受到構象異質性、溶液條件等因素影響較大,且不能提供原子級或結構域級別的解析。


適用性一:糖鏈不直接產生干擾信號,主鏈構象仍可監測

糖鏈本身并不在CD信號響應區(尤其是遠紫外區)產生顯著吸收,因此在理論上并不會直接遮蔽蛋白主鏈的CD信號。這意味著,即使存在糖基化修飾,CD依然可以反映出dànbáizhì骨架的主要二級結構組成。特別是當糖鏈修飾程度較低、分布較為分散,或位于結構表面不影響折疊核心時,CD所得光譜與非糖基化蛋白類似,分析結果可供研究者參考。在實際研究中,CD常被用于評估糖基化是否顯著改變蛋白主鏈的折疊狀態,從而判斷修飾對構象穩定性是否具有調節作用。這類用途突出CD在趨勢判斷中的功能價值。


適用性二:結構快速篩查、構象對比場景中具實用價值

CD技術由于靈敏度高、響應快、對樣品濃度要求低,非常適合用于以下糖蛋白研究情境:


  • 對比不同表達體系產物的整體構象差異;

  • 評估糖基化對蛋白熱穩定性的影響;

  • 初步判斷糖蛋白是否處于天然折疊狀態;

  • 在突變或修飾前后監測構象變化趨勢。


這些應用均不依賴原子級信息,而更注重結構輪廓變化,因此CD可以作為初篩工具,為后續高分辨率結構研究提供參考依據。


局限性一:糖鏈引起背景吸收,信噪比下降

盡管糖鏈不直接產生強CD信號,但其在短波長區域可能引發背景吸收,尤其是在含有多個糖基位點或大分子量聚糖修飾時。這種背景干擾可能導致190–200nm波段信號質量下降,影響數據穩定性和可靠性。此外,CD信號強度對樣品濃度和光程高度敏感,當糖鏈數量較多時,為避免吸收過強而降低樣品濃度,可能進一步削弱可檢測的主鏈信號,限制分析結果的分辨率。


局限性二:構象柔性增加,信號平均效應增強

糖鏈具有高度柔性,常處于多個構象之間動態轉換,這種結構異質性在CD光譜中表現為信號模糊或特征峰不明顯。當糖鏈占分子質量較大比例或修飾密度較高時,整個蛋白的構象一致性降低,CD光譜反映的是一個平均化的、動態的結構輪廓,較難解析出具體的二級結構比例。這種平均效應尤其影響CD擬合算法對α-螺旋和β-折疊等結構類型的定量評估,導致分析結果偏離真實構象狀態。


局限性三:空間分辨率低,無法定位結構變化來源

CD光譜提供的是整體結構特征的“投影”,無法對不同結構域、修飾位點或糖鏈本身的構象變化進行區分。例如,如果CD光譜顯示某一構象變化,無法明確這一變化是源于糖鏈的添加、核心結構域的不穩定,還是溶液條件的改變。因此,當研究目標涉及特定位點的構象動態,或者需分析糖鏈與蛋白主鏈之間的局部構象耦合關系時,CD無法勝任此類精細化解析任務。


適用與局限的平衡:如何合理使用CD技術?

CD在糖蛋白研究中既有其可操作空間,也存在清晰的應用邊界:


  • 適用的,是整體結構趨勢分析:如主鏈構象是否改變、熱穩定性是否下降、不同表達產物是否一致。

  • 局限的,是細節解析和修飾定位問題:如糖鏈對局部結構影響、糖鏈自身構象、不同修飾位點對結構的獨立貢獻。


CD應被視為一種支持性工具,適合早期篩查或輔助判斷,而非用于替代高分辨率結構方法。在多技術聯用的策略中,CD可以與質譜、冷凍電鏡、NMR等手段形成有效互補,提升整體結構研究效率。


圓二色性光譜作為經典的構象分析工具,在糖蛋白研究中仍有可用價值,尤其在對趨勢、差異、穩定性等維度進行評估時能夠發揮有效作用。但必須明確,其分析深度和精度有限,不能獨立完成復雜結構問題的解析任務。如您正面臨糖蛋白結構表征、構象分析或方法選擇的技術難題,歡迎聯系百泰派克生物科技,獲取zhuānyè建議與定制化解決方案,助力科研進展更進一步。


百泰派克生物科技特色項目


一、蛋白測序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統對dànbáizhì序列進行分析,提供基于質譜的蛋白測序分析服務,包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析,Nduāncèxù,Cduāncèxù和全序列分析,以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務。對于未知理論序列的dànbáizhì,提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務,對蛋白序列進行分析。


※服務優勢:

1.采用目前世界上優良的質譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實現對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;

4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug,即可完成檢測;

6.測序不受N端封閉,PEC和和糖基化等N端修飾的影響。



二、dànbáizhì組學

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質譜平臺結合Nano-LC,提供定量dànbáizhì組學、靶向dànbáizhì組學、多肽組學、翻譯后修飾蛋白組學等多種dànbáizhì組學分析服務。此外,百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學服務,助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫學及高通量修飾組學等研究工作。


※服務優勢:

1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規模實驗分析,發現新的生物標記物;

2.體內體外多種dànbáizhì標記方法,適用于分析組織、細胞、血液等多種樣品;

3.質譜分析靈敏度高,實驗結果重復度高;

4.可檢測較低豐度蛋白,線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學分析,分析更系統準確。



三、單細胞質譜流式技術分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質譜流式系統進行單細胞質譜流式技術分析,采用金屬元素標記物(通常是金屬元素標記的特異抗體)標記細胞表面和內部的分子,然后用流式細胞原理分離單個細胞,再用電感耦合等離子體質譜(ICP-MS)分析單個細胞的原子質量譜,zuì后將原子質量譜數據轉換為細胞表面和內部的信號分子表達量。


※服務優勢:

1.技術優良,*技術空白

采用金屬標記抗體技術,避免了傳統流式熒光通道少且易相互影響的問題。可在單細胞層面上對多種指標同時進行表征,百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白。

2.分析數量大,成本較低

單細胞RNAseq受成本等因素限制,所有樣本細胞匯總的分析數目一般在2x10^4個左右,而流式質譜技術一次(單樣本)就可分析至少10^5的細胞,實現了數量級的提高,且成本不高于單細胞RNAseq。

3.應用前景大

①流式質譜結果可以給出細胞亞群的變化,在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景;

②將金屬標簽技術與其他技術結合會有新應用方向。除常規蛋白外,質譜流式細胞技術還可用于蛋白翻譯后修飾;

③可檢測細胞存活率、細胞大小、mRNA轉錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。



四、基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發現

百泰派克生物科技的基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發現一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優化的高通量免疫多肽組學分析平臺進行免疫肽組學分析,可從zuì小的樣品材料中進行可重復的識別和定量。該服務可以應用于大規模的研究,旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案,深入挖掘未知的靶標。



五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質譜技術,MALDI TOF,高效色譜分離技術,提供一系列完善的生物藥物分析方案,從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結構分析,到產品變異性和純度分析。旨在提供優質生物藥物分析服務,幫助生物醫藥生產商提高生物藥物品質。



百泰派克生物科技七大檢測平臺

糖蛋白結構能否用圓二色性(CD)分析?適




百泰派克生物科技-生物制品表征,生物質譜多組學優質服務商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫療器械行業提供質量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規和指導原則,通過CNAS/ISO9001雙重質量體系認證,建立了完備的質量體系,數據冷熱/異地備份,設備定期計量/期間核查,軟件審計追蹤,為客戶提供一體化解決方案和技術服務,支持新藥研發、藥物申報注冊和生產放行。

1.公司采用ISO9001質量控制體系,zhuānyè提供以質譜為基礎的CRO檢測分析服務;

2.獲國家CNAS實驗室認可,為客戶提供符合全球藥政法規的藥物質量研究服務;

3.業務范圍覆蓋dànbáizhì組學、多肽組學、代謝組學、生物藥物表征、單細胞分析、單細胞質譜流式、生信云分析以及多組學生物質譜整合分析等;

4.七大質量控制檢測平臺,滿足您一站式服務需求;

5.服務3000+企業,10000+客戶的選擇;

6.致力于為您提供優質的生物質譜分析服務!



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