中文名稱：小鼠腫瘤標志物（CA724）Elisa 試劑盒

英文名稱：Mouse CA724 Elisa kit

小鼠腫瘤標志物（CA724）Elisa 試劑盒

實驗材料與試劑配制：

 1.儀器與材料：酶標儀（使用前預熱30分鐘），微量加液器、吸頭、蒸餾水或去離子水，濾紙。

2.緩沖液使用：加5ul的緩沖液于50ul的樣品中，如果樣品量不夠或者不確定，緩沖液和樣品的混合比例不要小于1:10即可。 混勻，靜置1小時備用（如果標本是血清或者血漿，此步驟忽略）。

3.洗液的配制：按1:100的比例配制洗液備用。

樣品收集、處理及保存

1.細胞培養上清：適用于檢測體外培養的細胞分泌性成份。用無菌管收集細胞上清液，以1000×g離心15分鐘，收集上清。

2.細胞：用PBS反復洗滌細胞3次，調整細胞濃度達到104-106/ml  左右，通過反復凍融，使細胞破壞并放出細胞內成份，或者細胞超聲粉碎，離心取上清液檢測。

3.血清：在室溫下，血液自然凝固，以1000×g離心15分鐘，取上清待測。

4.血漿：應根據標本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合后靜置10-20  分鐘后，以1000×g離心15分鐘，收集上 清。

5.體液：包括胸腹水、腦脊液，分泌物等。使用不含熱原和內毒素的離心管收集，以1000×g離心15分鐘，收集上清。

6.組織標本：切取組織標本，稱取重量0.5mg，加入500ul的PBS，用手工或勻漿器，或超聲破碎儀將標本勻漿，以2000-3000 rmp離心20  分鐘，收集上清進行檢測。

7.樣品中不能含有NaN3，因NaN3  抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

8.保存：如果樣品不能立即檢測，應將其分裝，-70 ℃保存，避免反復冷凍。保存過程中如出現沉淀，應再次離心。血液標本盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

操作步驟：

1.取出試劑盒，室溫（20-25℃）放置 30分鐘。

2.分組：取出 96孔板，根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數，把剩余的板條繼續冷藏處理。分別設標準 品組（6個濃度）、空白孔、待測樣品組。

注：為減少實驗誤差，保證準確性，建議設置復孔。

3.加樣：依照標準品的順序分別加入 100ul的標準品溶液于空白微孔中；空白對照孔加入 100ul的蒸餾水；其余微孔中加入

100ul的待測樣本。

4.加酶標溶液：標準品組、待測樣本組各孔中加入 50ul的酶標溶液（空白對照孔除外）。

5.溫育：酶標板用封板紙密封后，放入濕盒內于 37℃恒溫孵育1小時。

6.洗板：用稀釋后的洗滌液注滿每孔，靜置15-30s，充分清洗酶標板 5次，用吸水紙*拍干。

7.顯色：各孔加入顯色劑A液50ul后，再加入顯色劑B液50ul。

8.終止：25-37℃下避光反應10-15分鐘，加入50ul終止液。

9.讀板：在450nm波長讀取各孔的OD 值。 注：讀板時必須拭干板底殘留的液體和手指痕跡，讀板時間控制在終止反應后的 30分鐘內，以免影響準確性。

注意事項：

1.實驗操作中必須使用一次性吸頭，避免交叉污染。

2.加樣：加樣時，要控制加樣速度，避免*孔與zui后一孔間的時間間隔過大，否則將會導致不同的預孵育時間，從而影響實驗的準確性以及重復性。

3.孵育：嚴格按照說明書上規定的孵育時間和溫度進行。

4.反應時間的控制：加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化，如果顏色較深，請提前加入終止液終止反應。

5.建議實驗前預測樣品含量，如樣品濃度過高，應對樣品進行稀釋，計算結果時乘以相應的稀釋倍數。

6.建議使用本試劑盒時先做預實驗（即先做標準曲線，試用幾個標本），如果對本試劑盒有任何疑問，可和所購經銷商，如果因運輸過程導致試劑盒失效，可要求調換，但概不承擔產品本身以外的任何損失。

安全性

1． 避免人體直接接觸顯色劑A、B和終止液。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。

2． 實驗中不要進食、抽煙或使用化妝品。

3． 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

保存條件及有效期：

1.試劑盒保存：2-8℃

2.有效期：6個月