聚丙烯酰胺凝膠DNA 回收試劑盒使用說明書/D1250

產品名稱：聚丙烯酰胺凝膠DNA 回收試劑盒

貨號：D1250

規格：5T/ 20T /50T

生產商：北京索萊寶

聚丙烯酰胺凝膠DNA 回收試劑盒保存：室溫(15℃-25℃) 干燥保存，復檢期12 個月，2℃-8℃保存時間更長

聚丙烯酰胺凝膠DNA 回收試劑盒簡介：

本試劑盒采用可以高效、專一結合DNA 的硅基質材料和*的緩沖液系統，從聚丙烯酰胺凝膠上回收

DNA的 片段，同時除去蛋白質、其它有機化合物、無機鹽離子及寡核苷酸引物等雜質。使用本試劑盒回收的

DNA 可適用于后續各種常規操作，包括酶切、PCR、測序、文庫篩選、連接和轉化等實驗。

聚丙烯酰胺凝膠DNA 回收試劑盒操作步驟：

*次使用前請先在15ml 漂洗液中加入60ml 無水乙醇，所有離心步驟均可使用臺式離心機在室溫下離心。

1．將單一的目的DNA 條帶從聚丙烯酰胺凝膠中切下（盡量切除多余部分），放入1.5ml 離心管中，稱取重量，

用研磨杵將膠盡量擠壓碎。加入2 倍體積的溶液A 吹打混勻（每100mg 膠加入200ul 溶液A），75℃水浴

30 分鐘。

2．用1ml 的去尖吸頭吸取混合物至過濾柱中（將膠一起吸入，溶液過多時可分次加入）。13,000rpm 離心1

分鐘。將收集管中的濾出液轉入新離心管中。

3. 取六倍體積溶液B 加入原離心管中（每100mg 膠加入600ul），清洗管壁后加入過濾柱中(溶液過多時可分

次加入)，顛倒過濾柱或輕輕吹打幾次混勻，13,000rpm 離心1 分鐘。將所有收集的濾出液混合。

4．將總濾出液混勻后加入吸附柱中（溶液過多時可分次加入），13,000rpm 離心30-60 秒，倒掉收集管中的廢

液，將吸附柱重新放入收集管中。

5．向吸附柱中加入600μl 漂洗液（使用前請先檢查是否已加入無水乙醇），13,000rpm 離心30-60 秒，倒掉廢

液，將吸附柱重新放入收集管中。

6．向吸附柱中加入600μl 漂洗液，13,000rpm 離心30-60 秒，倒掉廢液。

7．將離心吸附柱放回收集管中，13,000rpm 離心2 分鐘，盡量除去漂洗液。將吸附柱開蓋置于室溫1-2 分鐘，

*晾干，以防止殘留的漂洗液影響下一步的實驗。

8．將吸附柱放到一個干凈離心管中，向吸附膜中間位置懸空滴加適量65–70℃預熱的洗脫緩沖液20-30μl，室溫放置2分鐘。13,000rpm離心2分鐘收集DNA溶液。注意：①為了增加回收效率，可將得到的溶液重新加入離心吸附柱中，13,000rpm再次離心1分鐘。②洗脫緩沖液體積不應少于20μl，體積過小影響回收效率。③洗脫液的pH值對于洗脫效率有很大影響，若用水做洗脫液應保證其 pH 值在 7.0-8.5 之間。

9．DNA回收產物直接后續實驗或者-20度保存。

聚丙烯酰胺凝膠DNA 回收試劑盒注意事項：

1．電泳時好使用新的電泳緩沖液，以免影響電泳和回收效果。

2．切膠時，紫外照射時間應盡量短，以免對DNA造成損傷。

3.本試劑盒對＜50bpDNA的片段回收效率偏低（30%左右），如要回收，應加大結合液的體積，延長吸附和洗脫的時間。

4.回收率與初始 DNA 量和洗脫體積有關，初始量越少、洗脫體積越小，回收率越低

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