革蘭氏染色法是細(xì)菌學(xué)中廣泛使用的一種鑒別染色法，媒染劑碘液進(jìn)入菌體后與結(jié)晶紫結(jié)合，革蘭氏陽性菌對(duì)碘與結(jié)晶紫攝取量多且牢固，不易被酒精脫色。革蘭氏陰性菌對(duì)碘與結(jié)晶紫攝取量少，不牢固，易被酒精脫色。為觀察方便，脫色后再用一種紅色染料如堿性蕃紅進(jìn)行復(fù)染。陽性菌仍帶紫色，陰性菌則被染上紅色。 
革蘭氏染色液操作步驟： 
1、標(biāo)本處理： 
（1）.有菌部位的標(biāo)本，如痰液、糞便、各種拭子、創(chuàng)面等可直接涂片。 
（2）.無菌部位的標(biāo)本，如腦脊液、胸水、腹水、膽汁、尿液、關(guān)節(jié)液等，應(yīng)取適量標(biāo)本（zui高可達(dá)5-7ml）,經(jīng)3000rpm 離心10min.，取沉渣涂片染色。 
2、涂片制作：菌液涂片時(shí)，用接種環(huán)沾取菌液點(diǎn)在載玻片上，標(biāo)本可直接在玻片上涂布；菌落涂片時(shí)，先取生理鹽水一滴，置玻片上，用接種針挑取菌落在鹽水中涂布。制作的涂片應(yīng)自然干燥，并經(jīng)火焰固定，固定的溫度不宜過高，以玻片背面接觸手背不燙為準(zhǔn)，否則可能使細(xì)菌形態(tài)改變。將固定后的涂片進(jìn)行染色。  
3、染色方法： 
革蘭氏染色的關(guān)鍵在于嚴(yán)格掌握酒精脫色程度，如脫色過度，則陽性菌可被誤染為陰性菌；而脫色不夠時(shí)，陰性菌可被誤染為陽性菌。此外，菌齡也影響染色結(jié)果，如陽性菌培養(yǎng)時(shí)間過長，或已死亡及部分菌自行溶解了，都常呈陰性反應(yīng)。 
（1）.加上結(jié)晶紫后，染色1分鐘，水洗。 
（2）.加上碘液后染色1分鐘，水洗。 
（3）.加上95%酒精,搖動(dòng)玻片,根據(jù)涂片厚度,脫色約30-60秒，水洗,吸去水分。 
（4）.加上蕃紅后，染色1分鐘，水洗。 
（5）.吸干或在空氣中涼干后，油鏡鏡檢。 
4．結(jié)果觀察：紫色為革蘭氏陽性，紅色為革蘭氏陰性。 
 革蘭氏染色液[注意事項(xiàng)]： 
1．標(biāo)本涂片不能太厚，嚴(yán)格按操作要求進(jìn)行。 
2．玻片通過火焰溫度不能太高。 
3．若涂片較厚，應(yīng)延長脫色時(shí)間，直至不再出現(xiàn)紫色為止。 
4．碘液變透明，則不能使用。 
5. 水洗時(shí)動(dòng)作要輕柔,沿載玻片對(duì)角線方向用洗瓶沖洗,以免把菌體沖掉。