苯基高流速瓊脂糖微球（Phenyl Bio-Sep 6FF）

產品說明書

苯基瓊脂糖微球是將苯基鍵合在6FF瓊脂糖微球上形成的一種可利用疏水相互作用來實現目標產品純化分離的疏水類介質。用于生物大分子和乙肝疫苗的純化分離。

1.外觀：本品為白色球狀凝膠,無嗅、無味、無肉眼可見雜質。

2.理化指標

      *柱子：內徑16mm、柱長30cm。柱床高15cm,25℃, 流動相為0.1mol/LNaCl。

3． 包裝

產品以聚胺酯瓶密封包裝，外貼標簽，注明“品名、體積、顆粒大小、保質期、批號、生產日期、生產單位及地址” 等內容。所選用的包裝應有利于保證產品質量、方便運輸和貯存。

4. 運輸

運輸中應避免日曬、雨淋、重壓，嚴禁與有毒、有害物品混運。

5. 貯存

產品應密封貯存在4℃~30℃（保存溶液為20% 乙醇+0.1M醋酸鈉），通風、干燥、清潔的地方。不能冷凍。

用過的柱子貯存在4℃（20% 乙醇）。

6.保質期：暫定5年。

7.應用

苯基瓊脂糖微球是一種疏水層析介質，利用樣品中組分疏水性的不同進行分離。用于生物大分子的純化分離。

下面簡要介紹介質的使用過程。

7.1 裝柱

⑴讓所有的材料和試劑達到室溫。配制初始緩沖液（平衡液）和洗脫緩沖液。

 ⑵根據柱子大小取所需量的凝膠，清洗掉20%乙醇，抽干，用初始緩沖液（按凝膠：緩沖液=3：1的比例）配成勻漿。勻漿作脫氣處理。

⑶將柱內及柱子底端用水或緩沖液潤濕并保持一小段液位（液面略高于濾膜），務必使底端無氣泡。

⑷  用玻璃棒引導勻漿沿著柱內壁一次性倒入柱內，注意勿使產生氣泡。打開柱子出液口，使凝膠在柱內自由沉降，連結好柱子頂端柱頭。

⑸ 打開蠕動泵，讓緩沖液用使用時流速的1.33倍的流速流過，使柱床穩定。用2~3倍柱體積的緩沖液平衡柱子。

7.2平衡

讓平衡緩沖液以一定流速流過柱子，到流出液電導和pH不變。平衡緩沖液一般是高鹽濃度的緩沖液，如0.02~0.05mol/L的PBS加1~2.5mol/L(NH₄)₂SO₄等。

7.3上樣

⑴樣品用平衡液配制，渾濁的樣品要離心和過濾后上樣。

⑵一般情況是讓目標產品結合在柱子上，用平衡液洗去雜質，再選擇一種洗脫液洗下目標產品。

⑶介質對樣品組分吸附的程度取決于樣品的疏水性質、流動相的離子強度和溫度。鹽濃度大、溫度高或樣品組分疏水性強，介質對組分吸附牢。

7.4洗脫

疏水介質可用減小鹽濃度進行洗脫。加表面活性劑或有機溶劑可加強洗脫。zui常用的洗脫液是低鹽濃度緩沖液，如0.02~0.05mol/L的PBS。

7.5再生

一般用低鹽濃度的緩沖液洗，洗10倍以上柱體積，接著用結合蛋白的平衡液洗到平衡，可再次使用。

若有失活蛋白質或脂類物質在再生時洗不掉，可用在位清洗（CIP）除去。

7.6 在位清洗

⑴ 對于以離子鍵結合上去的蛋白，可以用2M Nacl去除。

⑵ 對沉淀蛋白、對以疏水性結合的蛋白或脂類，可用1M NaOH 去除。

⑶ 對強疏水性結合的蛋白、脂類等，用4~10倍柱體積的70%乙醇或30%異丙醇清洗，但要注意有機溶劑的濃度以梯度的方式逐漸增加，否則容易產生氣泡。

清洗完畢后，用至少3倍緩沖液平衡柱子。

7.7注意

在裝柱、使用和保存柱子的時候，要避免柱子流干，氣泡進入。

7.8 去熱源

用0.5M的氫氧化鈉清洗柱子5~6小時或用0.1M的氫氧化鈉24小時。或用以下方法步驟去除：

⑴ 2倍柱體積的70%乙醇

⑵ 2倍柱體積50mM Tris-Hcl pH7.5

⑶ 1倍柱體積4M尿素

⑷ 3倍柱體積的Tris緩沖液+0.1M Nacl

以上緩沖液都在無熱源的雙蒸水中配制

7.9 消毒

用0.5~1M NaOH室溫下洗8~10倍柱體積，初始緩沖液平衡柱子。

7.10滅菌

置介質于高壓滅菌鍋中120℃下20分鐘。