G0170 細胞自噬染色檢測試劑盒(MDC 法) Solarbio染色劑試劑盒
- 公司名稱 北京索萊寶科技有限公司
- 品牌 SOLARBIO/索萊寶
- 型號 G0170
- 產地
- 廠商性質 其他
- 更新時間 2016/10/14 15:12:05
- 訪問次數 905
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細胞自噬染色檢測試劑盒(MDC 法)
貨號:G0170
規格:100T
有效期 : 12個月有效。
供應商:Solarbio
產品 說明 :
自噬(autophagy)是細胞受到刺激后吞噬自身的細胞質或細胞器,終將吞食物在溶酶體內降解的過程,自噬體(autophagosome)為雙層膜包被的圓形或橢圓形結構,內含細胞質、長壽蛋白質和異常蛋白聚集物,損傷或多余細胞器如線粒體、粗面內質網和微體、病毒和細菌等。
單丹磺酰尸胺(Dansylcadaverine,MDC )是一種熒光色素,是嗜酸性染色劑,通常被用于檢測自噬體形成的特異性標記染色劑,其檢測激發濾光片波長 355nm。阻斷濾光片波長 512nm。細胞自噬染色檢測試劑盒(MDC 法), 適用于培養細胞的自噬染色, 又稱為 MDC 染色液, 可與 EB 合用雙染。
自備材料:
熒光顯微鏡、低速離心機、EB 、載玻片、蓋玻片
操作步驟(僅供參考) :
( 一) 、MDC 單獨染色:
1、 用去離子水稀釋10×Wash buffer至1×。
2、 800g離心5min,收集細胞,用300~400µl的1×Wash buffer清洗細胞1次,棄上清。
3、 加入適量的1×Wash buffer重懸細胞,計數并調節細胞濃度至10 6 /ml。
4、 取適量90µl的細胞懸液至新的EP管中,加入10µl的MDC Stain,輕輕混勻。
5、 室溫避光染色15~45min。
6、 800g離心5min,收集細胞,用300~400µl的1×Wash buffer清洗細胞2次,棄上清。
7、 加入100µl的Collection buffer重懸細胞,滴加于載玻片上并加蓋玻片。
8、 熒光顯微鏡下觀察(激發濾光片波長355nm,阻斷濾光片波長512nm),計數并拍照。
( 二) 、與EB 雙染色:
1、 用去離子水稀釋10×Wash buffer至1×。
2、 800g離心5min,收集細胞,用300~400µl的1×Wash buffer清洗細胞1次,棄上清。
3、 加入適量的1×Wash buffer重懸細胞,計數并調節細胞濃度至10 6 /ml。
4、 取適量90µl的細胞懸液至新的EP管中,分別加入10µl的MDC Stain和0.2µM EB染色液,輕輕混勻。
5、 滴加于在玻片上,室溫避光染色15~30min,加蓋玻片。
6、 熒光顯微鏡下觀察(激發濾光片波長512nm),計數并拍照。
染色結果:
正常細胞 細胞被均勻染成黃綠色熒光
凋亡細胞 染色質濃縮, 細胞核碎裂成點狀, 被染
成大小不一、致密濃染的綠色顆粒
注意事項:
1、 MDC Stain和EB試劑有一定毒性,請小心操作。
2、 吖啶橙染色常與EB染色合用,可區分出正常細胞、凋亡細胞及壞死細胞。
3、 操作過程中應注意減少試劑暴露于強光下的時間。
4、 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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