【友情提示】：本產品僅供科研研究使用，不得用于人體臨床直接檢測。避免給您帶來不必要的損失，請仔細閱讀購買說明！

產品名稱：酶活分光光度試劑盒

規(guī)格 : 50管/24樣、100管/48樣

測試方法：微量法、可見分光光度法

測定意義：

LDH（EC 1.1.1.27）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，是糖酵解途徑的末端酶，催化丙酮酸與乳酸之間的可逆反應，伴隨著NAD+/NADH之間互變。

測定原理：

LDH催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸，丙酮酸進一步與2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙，在堿性溶液中顯棕紅色，顏色深淺與丙酮酸濃度成正比。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計/酶標儀、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

樣品制備：

1）直接或稀釋使用清亮無色中性液體樣品，體積可達2.000ml。

2）過濾混濁溶液。

3）除去樣品中的CO2 。

4 ）加氫氧化鉀或氫氧化鈉將酸性樣品的PH值調至8.0。

5 ）調整酸性淺色樣品的PH值至8.0，孵育約15分鐘。

6 ）用空白樣品做對照測定有色樣品（如有必要調整PH值至8.0）。

7 ）用PVPP（ 聚乙烯吡咯烷酮）或聚酰胺處理深色未經稀釋或體積更大的樣品。

8 ）壓碎、攪勻固體或半固體樣品，用水溶解提取。

9 ）用Carrez試劑將含有蛋白質的樣品去蛋白。

10）.含脂肪的樣品用熱水提取。

特點:

(1)應用廣泛

由于各種各樣的無機物和有機物在紫外可見區(qū)都有吸收，因此均可借此法加以測定。到目前為止,幾乎化學元素周期表上的所有元素(除少數放射性元素和惰性元素之外)均可采用此法。

(2)靈敏度高

由于相應學科的發(fā)展，使新的有機顯色劑的合成和研究取得可喜的進展，從而對元素測定的靈敏度大大提高了一步。特別是由于多元絡合物和各種表面活性劑的應用研究，使許多元素的摩爾吸光系數由原來的幾萬提高到幾十萬。相對于其它痕量分析方法而言，光度法的精密度和準確度一致是比較高的。不但在實際工作中光度法被廣泛采用，在標準參考物質的研制中，它更受重視，很多光度分析法已制定成為標準方法。

(3)選擇性好

目前已有些元素只要利用控制適當的顯色條件就可直接進行光度法測定，如鈷、鈾、鎳、銅、銀、鐵等元素的測定，已有比較滿意的方法了。

(4)準確度高

對于一般的分光光度法來說，其濃度測量的相對誤差在1-3%范圍內，如采用示差分光度法測量，則誤差往往可減少到千分之幾。

(5)適用濃度范圍廣

可從常量(1-50%)(尤其是使用示差法)到痕量(10-6-10-8%)(經預富集后)。

(6)分析成本低、操作簡便、快速。

酶活分光光度試劑盒操作步驟：

實驗開始前，各試劑均應平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。實驗前應預測樣品含量，如樣品濃度過高時，應對樣品進行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍，計算時再乘以相應的稀釋倍數。

1.加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應120分鐘。為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。

2.棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl（在使用前一小時內配制），酶標板加上覆膜，37℃反應60分鐘。

3.溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內液體拍干）。

4.每孔加檢測溶液B工作液（同檢測A工作液） 100μl，酶標板加上覆膜37℃反應60分鐘。

5.溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內液體拍干）。

6.依序每孔加底物溶液90μl，酶標板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

7.依序每孔加終止溶液50μl，終止反應，此時藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性，底物反應時間到后應盡快加入終止液。