人白脂素(Asprosin)Elisa試劑盒

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被人白脂素(Asprosin)捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并徹di洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人白脂素(Asprosin)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

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樣本處理及保存

1. 血清：將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2小時或4℃過夜，然后1000×g離心20 分鐘，取上清即可，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
2. 血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本，并將標本在采集后的30分鐘內于2-8℃ 1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
3. 組織勻漿：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

4. 細胞培養物上清或其它生物標本：請1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

注：標本溶血會影響最后檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。

5保存：在收集樣本前都必須有一個完整的計劃，必須清楚要檢測的成份是否足夠穩定。對收集后當天就進行檢測的樣本，及時儲存在4℃備用。對于隔天再檢測的樣本，及時分裝后凍存在-20℃備用，有條件的，最好-70℃凍存備用。標本應避免反復凍融。

人白脂素(Asprosin)Elisa試劑盒實驗操作步驟

1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2. 設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；

3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。

4. 除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。

操作注意事項

1、嚴格按照規定的時間和溫度進行溫育以保證準確結果。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。

2、洗板不正確可以導致不準確的結果。在加入底物前確保盡量吸干孔內液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。

3、消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值。

4、底物顯色液應呈無色或很淺的顏色，已經變藍的底物液不能使用。

5、避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結果。

6、在儲存和溫育時避免強光直接照射。

7、平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。

8、任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應試劑的生物活性。

9、不能使用過期產品。

10、如果可能傳播疾病，所有的樣品都應管理好，按照規定的程序處理樣品和檢測裝置。

通常ELISA試劑盒分兩種規格 48T和 96T ,單標準對照最多可以分別檢測 42 和90個樣本,板子可以拆卸，可多次做實驗，每次都需要至少用掉6個孔做標準曲線，請廣大新老客戶訂購時注意樣本個數決定好合適的規格，以免產生不夠用和浪費的情況。歡迎廣大新老客戶前來選購，祝大家實驗順利！