化工儀器網(wǎng)>產(chǎn)品展廳>試劑標(biāo)物>常用實(shí)驗(yàn)試劑>高純有機(jī)試劑>31194 大鼠沉默調(diào)節(jié)蛋白2（SIRT2）elisa試劑盒
31194 大鼠沉默調(diào)節(jié)蛋白2（SIRT2）elisa試劑盒
- 公司名稱 廈門侖昌碩生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號(hào) 31194
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間 2023/10/12 10:34:32
- 訪問次數(shù) 177
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集研發(fā)、生產(chǎn)、銷售、服務(wù)及品牌代理為一體的生物技術(shù)公司，目前可提供各種抗體、免疫學(xué)相關(guān)的檢測(cè)試劑盒、胎牛血清，動(dòng)物抗血清等高品質(zhì)產(chǎn)品及服務(wù)，涵蓋分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)等生命科學(xué)領(lǐng)域。
| CAS | 原裝,質(zhì)量問題包退換 | 純度 | 咨詢 |
|---|---|---|---|
| 分子量 | 咨詢 | 分子式 | 實(shí)驗(yàn)試劑 |
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 96T/48T |
| 貨號(hào) | 31194 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) |
| 主要用途 | 科研使用 |
帕金森氏病(PD)是第二常見的與年齡相關(guān)的神經(jīng)變性疾病.近年來(lái),諸多研究表明microRNA-7(miR-7)在帕金森氏病中發(fā)揮著非常重要的保護(hù)作用.然而, miR-7的生物學(xué)作用和在PD中的分子機(jī)制仍不清楚.本研究擬利用1-甲基-4-苯基吡啶離子(MPP+)對(duì)多巴胺能神經(jīng)元的毒性作用,采用不同劑量的MPP+誘導(dǎo)人神經(jīng)母細(xì)胞瘤SH-SY5Y細(xì)胞發(fā)生細(xì)胞凋亡,建立穩(wěn)定的急性PD細(xì)胞模型.該研究通過采用流式細(xì)胞術(shù),原位末段標(biāo)記(TUNE L)檢測(cè)DNA斷裂,JC-1染色檢測(cè)線粒體膜電位(ΔΨm),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)活性檢測(cè)以及核小體的富集程度等多種手段對(duì)細(xì)胞凋亡的檢測(cè),充分證明了miR-7在PD細(xì)胞模型中發(fā)揮的保護(hù)作用,高表達(dá)的niR-7可以有效抑制MPP+誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞凋亡,減少末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記陽(yáng)性率,降低線粒體膜電位,減弱caspase 3的活性和核小體的富集程度.Bax和沉默調(diào)節(jié)蛋白2(SIRT2)是的miR-7的直接靶基因.此外,通過分別過表達(dá)Bax和Sirt2,可以抵消miR-7的作用.Bax和Sirt2下游相關(guān)分子的表達(dá)也參與了miR-7對(duì)MPP+誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞凋亡的調(diào)控作用.這些發(fā)現(xiàn)無(wú)疑揭開了PD治療的新篇章,有潛在的應(yīng)用意義.部分建立穩(wěn)定的急性帕金森病細(xì)胞模型研究方法1.采用不同濃度IPP+(0,1,2,4mM)作用于SH-SY5Y細(xì)胞,作用時(shí)間持續(xù)24 h,終選取合適濃度的MPP+作用于SH-SY5Y細(xì)胞,建立帕金森病的細(xì)胞模型.2.針對(duì)已建立的帕金森病細(xì)胞模型,采用CCK-8試劑盒檢測(cè)細(xì)胞活性.3.采用活性氧檢測(cè)試劑盒檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧水平.4.乳酸脫氫酶釋放檢測(cè)試劑盒檢測(cè)細(xì)胞毒性時(shí)釋放的乳酸脫氫酶活性.結(jié)果1.加入不同濃度的MPP+時(shí),SH-SY5Y細(xì)胞中細(xì)胞活性隨MPP+濃度增加而下降.2.采用濃度為4 mM的MPP+作用于SH-SY5Y細(xì)胞建立帕金森病的細(xì)胞模型.3.mM的MPP+作用于SH-SY5Y細(xì)胞時(shí),細(xì)胞內(nèi)活性氧水平明顯升高.4.mM的MPP+作用于SH-SY5Y細(xì)胞時(shí)釋放的乳酸脫氫酶活性明顯升高.結(jié)論4 mM的MPP+作用于SH-SY5Y細(xì)胞時(shí)的影響了細(xì)胞的活性,促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)活性氧的生成,細(xì)胞所釋放乳酸脫氫酶的活性明顯升高,可建立穩(wěn)定的急性帕金森損傷模型.第二部分上調(diào)miR-7表達(dá)對(duì)帕金森病的細(xì)胞模型生物學(xué)作用的影響研究方法1.加入不同濃度的MPP+ 的 SH-SY5Y細(xì)胞,分別轉(zhuǎn)染miR-7 mimics和miR-NC, CCK-8法檢測(cè)各組細(xì)胞增殖和生長(zhǎng)能力.2.將細(xì)胞分為四組:空白組(miR-NC轉(zhuǎn)染的SH-SY5Y細(xì)胞),實(shí)驗(yàn)組(miR-7 mimics轉(zhuǎn)染的SH-SY5Y細(xì)胞),模型組(4mM 的 MPP+作用SH-SY5Y細(xì)胞,轉(zhuǎn)染miR-NC),治療組(4mM的MPP+作用SH-SY5Y細(xì)胞,轉(zhuǎn)染miR-7).3.活性氧檢測(cè)試劑盒,乳酸脫氫酶釋放檢測(cè)試劑盒檢測(cè)細(xì)胞毒性.4. AnncxinV-FITC/PI雙標(biāo)記流式細(xì)胞術(shù),原位末段標(biāo)記(TUNEL)檢測(cè)DNA斷裂,JC-1染色檢測(cè)線粒體膜電位(△Ψm),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)活性檢測(cè)以及核小體的富集程度檢測(cè)細(xì)胞凋亡.結(jié)果1.miR-7明顯提高不同濃度處理的MPP+的SH-SY5Y細(xì)胞的活性.2.miR-7降低MPP+作用于SH-SY5Y細(xì)胞所產(chǎn)生的細(xì)胞毒性.3.miR-7顯著抑制帕金森病細(xì)胞模型中SH-SY5Y細(xì)胞的凋亡.結(jié)論miR-7可抑制MPP+所誘導(dǎo)的人神經(jīng)母細(xì)胞瘤SH-SY5Y細(xì)胞的凋亡,降低其對(duì)細(xì)胞的毒性作用.因此, miR-7可以作為一種神經(jīng)保護(hù)劑,為緩解和治療帕金森病提供了新的策略和潛在的可能性.第三部分miR-7在帕金森病細(xì)胞模型中靶基因的預(yù)測(cè)與驗(yàn)證研究方法1.采用TargetScan, miRanda和PicTar等靶基因預(yù)測(cè)軟件,預(yù)測(cè)miR-7可能靶向Bax和Sirt2基因.2.構(gòu)建野生型和突變型Bax和Sirt2基因3'-UTR片段雙熒光素酶報(bào)告載體,并分別與miR-7或miR-NC質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染SH-SY5Y細(xì)胞,檢測(cè)熒光值.3.在帕金森病細(xì)胞模型的SH-SY5Y細(xì)胞中轉(zhuǎn)染miR-NC, miR-7mimics,分別采用qPCR和Western blo t檢測(cè)Bax和Sirt2 mRNA和Bax和Sirt2蛋白的表達(dá)變化.結(jié)果1. Bax和Sirt2基因3'-UTR各有一個(gè)序列片段可能與miR-7結(jié)合.2.雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)顯示,miR-7高表達(dá)可顯著抑制轉(zhuǎn)染Bax和Sirt2野生型片段細(xì)胞的熒光素表達(dá);而當(dāng)將結(jié)合位點(diǎn)突變后,上述抑制作用喪失.3. miR-7高表達(dá)抑制Bax 和 Sirt2基因mRNA和蛋白表達(dá).結(jié)論miR-7可靶向抑制人神經(jīng)母細(xì)胞瘤SH-SY5Y細(xì)胞Bax和Sirt2基因的表達(dá),并在MPP+誘導(dǎo)的帕金森病細(xì)胞模型中1niR-7與Bax和Sirt2基因mRNA和蛋白表達(dá)均呈負(fù)相關(guān),miR-7在MPP+誘導(dǎo)的帕金森病細(xì)胞模型中的低表達(dá)與Bax和Sirt2所參與的細(xì)胞凋亡通路有關(guān).第四部分miR-7 對(duì) Bax 和 Sirt2轉(zhuǎn)錄后調(diào)控作用機(jī)制的研究研究方法1.在不同濃度MPP+處理的SH-SY5Y細(xì)胞中單獨(dú)或共轉(zhuǎn)染miR-7和Sirt2, Western blot檢測(cè)Sirt2 和 Bim.2.半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)活性檢測(cè)細(xì)胞凋亡.3.在SH-SY5 Y細(xì)胞中單獨(dú)或共轉(zhuǎn)染miR-7和Bax, Western blot檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2, Bax, Cl-caspase 3和Cyt c的表達(dá).4.線粒體膜電位(△Ψm),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)活性以及核小體的富集程度檢測(cè)細(xì)胞凋亡.結(jié)果1.在SH-SY5Y細(xì)胞模型中高表達(dá)miR-7可抑制Bax和Sirt2的表達(dá);共轉(zhuǎn)染miR-7和Bax或Sirt2,外源性Bax或Sirt2的表達(dá)減弱miR-7對(duì)MPP+處理的SH-SY5Y細(xì)胞模型的保護(hù)作用.2.高表達(dá)miR-7抑制MPP+誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞凋亡,共轉(zhuǎn)染Bax或Sirt2可逆轉(zhuǎn)這一現(xiàn)象.3.半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)活性檢測(cè),JC-1染色檢測(cè)線粒體膜電位(△Ψm),以及核小體的富集程度均顯示共轉(zhuǎn)染Bax或Sirt2可逆轉(zhuǎn)miR-7對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用.4.在MPP+誘導(dǎo)的帕金森病細(xì)胞模型中,高表達(dá)miR-7抑制SH-SY5Y細(xì)胞中促凋亡蛋白Bim, Cl-caspase 3和Cyt c的表達(dá),促進(jìn)抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá),共轉(zhuǎn)染Bax或Sirt2則促進(jìn)Bim, Cl-caspase 3和Cyt c的表達(dá),抑制Bcl-2的表達(dá).結(jié)論miR-7作為帕金森病潛在的保護(hù)基因,可通過其靶基因Bax和Sirt2調(diào)控細(xì)胞凋亡信號(hào)通路,抑制神經(jīng)元細(xì)胞的凋亡.miR-7通過抑制其靶基因Bax和Sirt2的表達(dá),影響凋亡相關(guān)分子的表達(dá),進(jìn)而發(fā)揮對(duì)細(xì)胞凋亡的抑制作用,可能為利用microRNAs治療帕金森病提供一定的理論依據(jù).
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