目的:本實驗室以前的研究證實高同型半胱氨酸血癥能夠加重由血管緊張素Ⅱ誘導的小鼠腹主動脈瘤的發生,在發生動脈瘤局部血管發生嚴重血管炎癥,但其發生和發展的具體機制尚不十分清楚.本研究擬探索血管外膜的巨噬細胞在高同型半胱氨酸作用下,增加血管成纖維細胞炎癥和分泌基質金屬蛋白酶增加的機制. 方法:細胞培養:Raw264.7(小鼠巨噬細胞細胞系),原代巨噬細胞(腹腔來源,骨髓來源),原代成纖維細胞(貼塊法).免疫組化染色顯示組織處誘導型一氧化氮合酶(iNOS),精氨酸酶1(Arg1)水平,ELISA試劑盒檢測細胞上清白介素lβ(IL-1β), Griess法檢測細胞上清一氧化氮(NO)的釋放情況,明膠酶譜檢測基質金屬蛋白酶9(MMP-9)釋放量,Western Blot檢測炎性小體蛋白水平變化,RTPCR檢測炎癥因子轉錄水平變化. 結果:在血管緊張素Ⅱ誘導的腹主動脈瘤的組織切片上,血管外膜巨噬細胞高表達促進炎癥的iNOS,低表達抑制炎癥的Argl.體外實驗,100州同型半膚氨酸(Hcy)離體刺激Raw264.72h,4h,能夠使炎性小體復合物NLRP3,下游剪切激活的CaspaseI和成熟釋放的IL-1β增加一倍.在10ng/mlLPS的刺激下,給予Hcy8h能夠使原代巨噬細胞炎癥因子IL-1β, IL-6. iNOS mRNA合成水平,iNOS的蛋白表達水平(24h)及產物NO的合成釋放增加50%至70%.與此同時,由原代巨噬細胞釋放的MMP-9可以被Hcy作用24h和48h上調.使用Caspase 1抑制劑Z-YVAD-Fmk (15μM)或預先孵育葉酸(20μM)可以阻斷巨噬細胞炎性小體的形成及Hcy對于巨噬細胞的致炎作用巨噬細胞與在血管外膜占據多數的成纖維細胞發揮相互作用.一方面,應用Hcy刺激巨噬細胞24h后的上清液培養成纖維細胞的NADPH氧化酶的NOX4亞基明顯升高,成肌纖維標志物a-actin和SM-22a表達增多,分泌更多促炎細胞因子.另一方面,Hcy刺激成纖維細胞24h后的細胞上清,能促進巨噬細胞iNOS的合成表達.條件培養過程中,給予Z-YVAD-Fmk和葉酸可以阻斷巨噬細胞和成纖維細胞的相互作用.這些結果提示了巨噬細胞和成纖維細胞的致炎作用可能因相互作用而被放大. 結論:同型半胱氨酸通過激活巨噬細胞炎性小體,促進肌成纖維細胞表型轉化,進而可能是其促進腹主動脈瘤的發生和發展的重要機制之一.