實驗介紹

蛋白翻譯后修飾（post-translation modifications,PTM）是指對翻譯后的蛋白質進行共價加工的過程，通過在一個或多個氨基酸殘基加上修飾基團，可以改變蛋白質的理化性質，進而影響蛋白質的空間構象和活性狀態，亞細胞定位，折疊機器穩定性及蛋白互作。蛋白質發生翻譯后修飾時其分子質量會發生相應的改變，通過質譜能夠精確測定蛋白質的分子質量，但是含量低且動態范圍大，需要針對不同修飾類型采用相應富集方法。常見的蛋白翻譯后修飾主要有磷酸化、乙酰化、糖基化和泛素化等。

實驗流程

分類：

蛋白翻譯后修飾位點鑒定：IP獲得目的蛋白，SDS-PAGE分離純化目的蛋白，在經過LC-MS/MS質譜，數據庫檢索得到蛋白上的修飾位點。

磷酸化蛋白質組鑒定：采用主流的TiO2/IMAC富集方法，特異性高，富集效率好。

琥珀酰化蛋白質組鑒定：通過高分辨率、高掃描速度的質譜，對富集的琥珀酰化肽段進行大規模鑒定。

巴豆酰化蛋白質組鑒定：采用化學性質穩定巴豆酰化樹脂IP的方法，鑒定樣品中發生巴豆酰化的蛋白質以及相應的巴豆酰化位點。

糖基化蛋白質組鑒定：采用主流凝集素親和法富集N-糖基化肽段，旨在揭示蛋白質的調節功能。

乙酰化蛋白質組鑒定：可用于藥物作用靶點、疾病標志物篩選、植物脅迫/抗逆、作用機制等方面的研究。

優勢：

（1）高特異性的修飾抗體

（2）高分辨率、高靈敏度質譜儀

（3）鑒定通量高

（4）可與代謝組學等進行多組學聯合分析