Roche羅氏 064027 12001 FastStartEssentialDNAGreenMaster（Roche）

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 Roche Fast Start Essential DNA Green Master

Roche羅氏 064027 12001 FastStartEssentialDNAGreenMaster（Roche）  5×100反應(20μl)，產品簡介：

產品品牌：Roche羅氏

產品貨號：064027 12001

產品名稱：FastStartEssentialDNAGreenMaster（Roche）

產品規格：5×100反應(20μl)

Roche羅氏 064027 12001 FastStartEssentialDNAGreenMaster（Roche）  5×100反應(20μl)，產品說明：

FastStart Essential DNA Green Master是一種現成的反應混合物，使用LightCycler®Nano和LightCycleer®96儀器上的SYBR Green I檢測格式。用于8管條或單管中的熱啟動PCR。熱啟動PCR通過*小化反應開始時非特異性擴增產物的形成，顯zhu提高了PCR的特異性和min感性。

應用

FastStart Essential DNA Green Master提供試劑，包括SYBR Green I染料，用于使用LightCycler®96儀器和LightCycleer®Nano儀器擴增和檢測DNA。該試劑盒非常適合用于基因檢測和定量的熱啟動PCR分析。

PCR產物的產生可以通過SYBR Green I熒光信號的測量來檢測。SYBR Green I染料插入DNA螺旋（Zipper，H.等人，2004）。在溶液中，未結合的染料顯示很少的熒光；然而，熒光（波長，530nm）在DNA結合時大大增強。因此，在PCR期間，SYBR Green I熒光的增加與產生的雙鏈DNA的量成正比。由于SYBR Green I染料非常穩定（在30個擴增周期中僅損失6%的活性），并且LightCycler®96儀器的光學系統與激發和發射波長相匹配，因此它是測量總DNA時的shou選試劑。

在LightCycler®96系統上實時PCR期間，SYBR Green I檢測DNA的基本步驟如下：

在擴增開始時，反應混合物包含變性DNA、引物和染料。未結合的染料分子微弱地發出熒光，產生*小的背景熒光信號，該信號在計算機分析期間被減去。

引物退火后，少數染料分子可以與雙鏈結合。DNA結合導致SYBR Green I分子在激發時發光的顯著增加。

在伸長過程中，越來越多的染料分子與新合成的DNA結合。如果連續監測反應，則實時觀察熒光的增加。在下一個加熱周期DNA變性后，染料分子被釋放，熒光信號下降。

在每個PCR周期的延伸步驟結束時進行熒光測量，以監測擴增DNA的增加量。

為了證明只擴增了所需的PCR產物，您可以在PCR后進行熔化曲線分析。在熔化曲線分析中，反應混合物緩慢加熱至95°C，這導致雙鏈DNA熔化，SYBR Green I熒光相應降低。儀器持續監測這種熒光降低，并將其顯示為熔化峰。每個熔化峰代表特定DNA產物的特征熔化溫度（Tm）（其中DNA為50%雙鏈和50%單鏈）。決定dsDNA Tm的*重要因素是該片段的長度和GC含量。如果PCR僅產生一個擴增子，熔化曲線分析將僅顯示一個熔化峰。如果存在引物二聚體或其他非特異性產物，它們將顯示為額外的熔化峰。因此，檢查PCR產物的Tm可以與在凝膠電泳中通過長度分析PCR產物進行比較。

此產品的工作原理

FastStart Essential DNA Green Master是一種即用即用的反應混合物，專門設計用于在LightCycler®480 Multiwell Plates 96中應用SYBR Green I檢測格式，或在LightCycler®96儀器上應用LightCycler®8-管條（白色）。用于執行熱啟動PCR。熱啟動PCR已被證明通過*小化反應開始時非特異性擴增產物的形成，顯著提*了PCR的特異性和min感性（Chou，Q.等人，1992，Kellogg，D.E.等人，1994，Birch，D.E.，1996）。FastStart Taq DNA聚合酶是一種化學修飾形式的耐熱重組Taq DNA多聚酶，在75°C以下無活性。這種酶只有在高溫下才有活性，此時引物不再非特異性結合。在循環開始之前，酶在單個預培養步驟（95°C，5至10分鐘）中被wan全激活（通過去除阻斷基團）。激活不需要其他熱啟動技術典型的額外處理步驟。

  Roche Fast Start Essential DNA Green Master

產品訂購信息：

Roche羅氏 064027 12001 FastStartEssentialDNAGreenMaster（Roche）  5×100反應(20μl)