QuantiTect Probe RT-PCR Kit
使用序列特異性探針，進行一步法real-time RT-PCR
高特異性檢測低拷貝的模板
準確檢測各種起始量的模板
無需優化反應和循環條件
可使用各種序列特異性探針在各種定量PCR儀上使用
QuantiTect Probe RT-PCR Kit 提供含有 HotStarTaq DNA Polymerase、ROX參比染料和 dNTP混合液的預混液。為便于使用，預混液可儲存在2-8°C條件下。dNTP混合液含有dUTP，可進行UNG處理。該試劑盒同時提供經優化的RT混合液（儲存在-20°C條件下），可高效、靈敏地對RNA模板進行逆轉錄，模板量適用范圍廣。
QuantiTect Probe RT-PCR Kit （200） For 200 x 50 ul reactions: 3 x 1.7 ml 2x QuantiTect Probe RT-PCR Master Mix, 100 ul QuantiTect RT Mix, 2 x 2 ml RNase-Free Water 204443 ￥6,050.00
QuantiTect Probe RT-PCR Kit （1000） For 1000 x 50 ul reactions: 25 ml 2x QuantiTect Probe RT-PCR Master Mix, 0.5 ml QuantiTect RT Mix, 20 ml RNase-Free Water
原理
Real-time RT-PCR過程中產生的非特異性產物和引物二聚體會與特異性產物競爭反應組分，從而干擾目標基因的準確定量。QuantiTect Probe RT-PCR Kit克服了這些問題，通過使用*的RT-PCR緩沖液促進引物、探針和PCR模板之間高特異性退火 （見圖"Specific annealing"）。此外，緩沖液中包含HotStarTaq DNA 聚合酶，相對其他聚合酶，該酶能提供更嚴謹的熱啟動（見圖"Highly specific amplification"）。

操作流程
QuantiTect Probe RT-PCR Kit無需進行繁瑣耗時的反應條件優化。只需簡單地將引物、探針和模板加入到即用型PCR預混液中，即可在各種定量PCR儀上開始反應 （見流程圖 和表"Components of the QuantiTect Probe RT-PCR Kit"）。

Components of the QuantiTect Probe RT-PCR Kit

組分   特性和優點
2x QuantiTect Probe RT-PCR Master Mix HotStarTaq DNA Polymerase 經改良的QIAGEN Taq DNA 聚合酶，實現高度嚴謹的熱啟動。
  QuantiTect Probe RT-PCR Buffer *的 RT-PCR 緩沖液，包含優化的KCl和（NH4）2SO4組成，促進高特異性的引物退火。
  dNTP mix 包括 dUTP, 可部分替代dTTP，兼容在可能有PCR產物交叉污染的情況下使用UNG處理。
  ROX dye 結合雙鏈DNA后產生強熒光信號。可定量任何目標基因，無需設計序列特異性探針。
QuantiTect RT Mix  Omniscript and Sensiscript Reverse Transcriptases  具有高 RNA親和力的特殊的酶混合物，便于轉錄復雜的二級結構。
2x QuantiTect Probe RT-PCR Master Mix   可儲存在2-8℃，無需反應成分解凍，便于更快的進行反應構建。

應用
QuantiTect Probe RT-PCR Kit包括HotStarTaq DNA聚合酶和*的RT-PCR 緩沖液，能夠高靈敏度定量低拷貝的RNA靶序列，并且可實現寬線性范圍的精確定量（見圖 "High sensitivity and efficiency, and wide dynamic range"）。在同一個管中連續進行逆轉錄和PCR不會影響靈敏度，通過與兩步法定量 RT-PCR的 CT 值對比可證明（見圖 "One-step RT-PCR with comparable performance to two-step RT-PCR"）。
Amount of cDNA/RNA Mean CT value
（two-step RT-PCR） Mean CT value
（one-step RT-PCR）
100 ng 24.66 24.66
10 ng 28.15 27.84
1 ng 31.42  31.49
0.1 ng 34.80 34.56
0.01 ng 37.78 37.66
One-step RT-PCR with comparable performance to two-step RT-PCR. Tenfold serial dilutions of cDNA or RNA （100 ng to 1 pg） prepared from leukocytes were analyzed in duplicate on the Mx3005 using primers and a FAM-labeled probe specific for IL1R2 （interleukin 1 receptor, type II）.  A  Two-step RT-PCR using the QuantiTect Probe PCR Kit （PCR efficiency: 101%）.  B  One-step RT-PCR using the QuantiTect Probe RT-PCR Kit （PCR efficiency: 104%）.  C  The CT values from the 2 amplification plots.
QuantiTect Probe RT-PCR Kit 可與各種定量PCR儀兼容，包括Applied Biosystems, Bio-Rad/MJ Research, Cepheid, Corbett, Eppendorf, Roche和Stratagene的定量PCR儀。