中文名稱：大鼠膽固醇（CH）酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

英文名稱：Rat Cholesterol （CH） ELISA Kit

產(chǎn)品規(guī)格：96T/48T

保存條件：2-8℃

有效期：6個(gè)月  

  實(shí)驗(yàn)材料與試劑配制：

1.儀器與材料：酶標(biāo)儀（使用前預(yù)熱30分鐘），微量加液器、吸頭、蒸餾水或去離子水，濾紙。

2.緩沖液使用：加5ul的緩沖液于50ul的樣品中，如果樣品量不夠或者不確定，緩沖液和樣品的混合比例不要小于1:10即可。 混勻，靜置1小時(shí)備用（如果標(biāo)本是血清或者血漿，此步驟忽略）。

3.洗液的配制：按1:100的比例配制洗液備用。

樣品收集、處理及保存

1.細(xì)胞培養(yǎng)上清：適用于檢測(cè)體外培養(yǎng)的細(xì)胞分泌性成份。用無(wú)菌管收集細(xì)胞上清液，以1000×g離心15分鐘，收集上清。

2.細(xì)胞：用PBS反復(fù)洗滌細(xì)胞3次，調(diào)整細(xì)胞濃度達(dá)到104-106/ml  左右，通過(guò)反復(fù)凍融，使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份，或者細(xì)胞超聲粉碎，離心取上清液檢測(cè)。

3.血清：在室溫下，血液自然凝固，以1000×g離心15分鐘，取上清待測(cè)。

4.血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合后靜置10-20  分鐘后，以1000×g離心15分鐘，收集上 清。

5.體液：包括胸腹水、腦脊液，分泌物等。使用不含熱原和內(nèi)毒素的離心管收集，以1000×g離心15分鐘，收集上清。

6.組織標(biāo)本：切取組織標(biāo)本，稱取重量0.5mg，加入500ul的PBS，用手工或勻漿器，或超聲破碎儀將標(biāo)本勻漿，以2000-3000 rmp離心20  分鐘，收集上清進(jìn)行檢測(cè)。

7.樣品中不能含有NaN3，因NaN3  抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。

8.保存：如果樣品不能立即檢測(cè)，應(yīng)將其分裝，-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍。保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。血液標(biāo)本盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量顆粒，檢測(cè)前先離心或過(guò)濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

操作步驟：

1.取出試劑盒，室溫（20-25℃）放置 30分鐘。

2.分組：取出 96孔板，根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)，把剩余的板條繼續(xù)冷藏處理。分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn) 品組（6個(gè)濃度）、空白孔、待測(cè)樣品組。

注：為減少實(shí)驗(yàn)誤差，保證準(zhǔn)確性，建議設(shè)置復(fù)孔。

3.加樣：依照標(biāo)準(zhǔn)品的順序分別加入 100ul的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中；空白對(duì)照孔加入 100ul的蒸餾水；其余微孔中加入

100ul的待測(cè)樣本。

4.加酶標(biāo)溶液：標(biāo)準(zhǔn)品組、待測(cè)樣本組各孔中加入 50ul的酶標(biāo)溶液（空白對(duì)照孔除外）。

5.溫育：酶標(biāo)板用封板紙密封后，放入濕盒內(nèi)于 37℃恒溫孵育1小時(shí)。

6.洗板：用稀釋后的洗滌液注滿每孔，靜置15-30s，充分清洗酶標(biāo)板 5次，用吸水紙*拍干。

7.顯色：各孔加入顯色劑A液50ul后，再加入顯色劑B液50ul。

8.終止：25-37℃下避光反應(yīng)10-15分鐘，加入50ul終止液。

9.讀板：在450nm波長(zhǎng)讀取各孔的OD 值。 注：讀板時(shí)必須拭干板底殘留的液體和手指痕跡，讀板時(shí)間控制在終止反應(yīng)后的 30分鐘內(nèi)，以免影響準(zhǔn)確性。

注意事項(xiàng)：

1.實(shí)驗(yàn)操作中必須使用一次性吸頭，避免交叉污染。

2.加樣：加樣時(shí)，要控制加樣速度，避免*孔與zui后一孔間的時(shí)間間隔過(guò)大，否則將會(huì)導(dǎo)致不同的預(yù)孵育時(shí)間，從而影響實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性以及重復(fù)性。

3.孵育：嚴(yán)格按照說(shuō)明書上規(guī)定的孵育時(shí)間和溫度進(jìn)行。

4.反應(yīng)時(shí)間的控制：加入底物后請(qǐng)定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化，如果顏色較深，請(qǐng)?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)。

5.建議實(shí)驗(yàn)前預(yù)測(cè)樣品含量，如樣品濃度過(guò)高，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋，計(jì)算結(jié)果時(shí)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

6.建議使用本試劑盒時(shí)先做預(yù)實(shí)驗(yàn)（即先做標(biāo)準(zhǔn)曲線，試用幾個(gè)標(biāo)本），如果對(duì)本試劑盒有任何疑問(wèn)，可和所購(gòu)經(jīng)銷商，如果因運(yùn)輸過(guò)程導(dǎo)致試劑盒失效，可要求調(diào)換，但概不承擔(dān)產(chǎn)品本身以外的任何損失。

安全性

1． 避免人體直接接觸顯色劑A、B和終止液。一旦接觸到這些液體，請(qǐng)盡快用水沖洗。

2． 實(shí)驗(yàn)中不要進(jìn)食、抽煙或使用化妝品。

3． 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

保存條件及有效期：

1.試劑盒保存：2-8℃

2.有效期：6個(gè)月