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【MDS Express】Cleanert PPT蛋白沉淀板產品使用操作

閱讀:164      發布時間:2025-7-18
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Cleanert PPT (Protein Precipitation Plate) 蛋白沉淀產品采用高純蛋白沉淀專用篩板,能夠有效阻截乙腈等常用蛋白沉淀溶劑,避免發生滲透現象。與傳統 PPT 方法相比,不需要額外耗時的樣品前處理步驟,可實現生物樣品( 血漿、血清等) 的自動化、高通量處理,在完成蛋白沉淀后,施加正壓或負壓收集流出液,從而實現血漿(或血清、尿液等)樣品的高通量蛋白去除。

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產品特點


操作簡便快速,孔內沉淀;


無滲漏現象,防止樣品過早流出和蛋白沉淀不完-全;


有效去除蛋白干擾,提高分析靈敏度。


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操作步驟


01

準備實驗 


將Cleanert PPT 96蛋白沉淀板放置于收集板上。 


注:放置時沉淀板與收集板缺口端對齊于左下端,這樣可快速正確調整放置位置。使左邊孔位顯示為“A-H",上端顯示為“1-12",便于查找和標識。 


02

加入沉淀試劑


每孔加入不少于3倍樣品體積的沉淀試劑,如乙腈或甲醇。 


注: Cleanert PPT 96蛋白沉淀板設計可保證乙腈加入后60 min、甲醇加入后15 min不會穿透,保證充足的操作時間。乙腈作為沉淀劑時,乙腈與樣品建議比例3:1以上;甲醇作為沉淀劑時,建議比例4:1以上。為保證獲得最佳沉淀效果,建議先加沉淀試劑再加入樣品。


03

加入待處理樣品


將待處理的血漿、血清等樣品分別加入到蛋白沉淀板各孔中。


注:如需分別添加內標物、稀釋樣品、加快上樣速度等操作,可預先將樣品分別移取至另一塊收集板中,使用多位移液槍進行移取樣品操作。當加入待處理樣品后,會和沉淀劑迅速作用生成沉淀,后續操作將不會引起沉淀板穿透。 


04

蛋白沉淀


將蛋白沉淀板放置于96位漩渦混合器上,調節轉速到600-800轉/min,充分混合5 min,然后靜置5 min。 


05

過濾 


使用正壓儀器將沉淀后澄清溶液全部壓入96孔接收板中(壓力推薦為0.03-0.04 MPa),蓋上硅膠蓋板,防止試劑揮發,待用于儀器測試。 


注:可根據樣品粘稠度調節壓力;當少量孔樣品流速較慢時也可適當提高壓力。 


實驗Q&A


Q

我按照操作步驟進行的實驗,但是收集到的濾液是渾濁的,可能是什么原因導致的?

A

如果收集到的溶液出現渾濁的情況,可能是沉淀不充分導致。可以通過調節沉淀試劑及用量、延長沉淀時間、增加渦旋轉速等方式改善。 

Q

對于全血基質的細胞裂解方式有建議嗎?

A

?建議1:將3份去離子水加入到1份全血樣本中,渦旋3-5秒,以3700 rpm的轉速離心10分鐘并收集上清液。

?建議2:在室溫下對全血樣本進行超聲處理15分鐘,然后以3700 rpm的轉速離心10分鐘,收集上清液

?建議3:將三份0.1M硫酸鋅/0.1M乙酸銨溶液加入一份全血樣本中。渦旋3-5秒,以3700 rpm的轉速離心10分鐘,收集上清液。


上清液收集之后,向蛋白沉淀板中加入3倍體積的乙腈,渦旋板兩分鐘。對板施加真空并收集流出物,氮吹干燥,在流動相中復溶。

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