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如何用酶標(biāo)儀檢測食品及飼料中的三聚氰胺

——酶聯(lián)免疫吸附定量測定法

適用：

利用酶聯(lián)免疫吸附測定法用于食品及飼料中三聚氰胺的定量測定。

檢測原理：

酶聯(lián)免疫吸附測定法定量測定三聚氰胺殘留。利用萃取液通過均質(zhì)及振蕩的方式提取樣品中的三聚氰胺進(jìn)行免疫測定。先將三聚氰胺酶標(biāo)記物，樣品萃取物及標(biāo)準(zhǔn)加入到已經(jīng)包被有三聚氰胺抗體的微孔中開始反應(yīng)。在30分鐘的孵育過程中，樣品萃取物中的三聚氰胺與三聚氰胺酶標(biāo)記物競爭結(jié)合微孔中的三聚氰胺抗體，孵育30分鐘后洗掉小孔中所有沒有結(jié)合的三聚氰胺及三聚氰胺酶標(biāo)記物。再用去離子水清洗結(jié)束后，每孔中加入清澈的底物溶液，結(jié)合的酶標(biāo)記物將無色的底物轉(zhuǎn)化為藍(lán)色的物質(zhì)。孵育30分鐘后停止此反應(yīng)，根據(jù)各孔顏色深淺進(jìn)行數(shù)據(jù)讀取。依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)的顏色得出樣品中三聚氰胺的的濃度值。

設(shè)備及材料：

1、具有450nm的酶標(biāo)分析儀

2、8頭或12頭洗板機(jī)（選配）

3、三聚氰胺檢測試劑盒

4、可吸取50ul的移液器及吸頭及.吸水紙

5、蒸餾水或去離子水

5、 20mM PBS： 0.62g NaH2PO4-2H2O+5.73gNa2HPO4-12H2O+9gNaCl ,蒸餾水定容至1000ml. 

6、清洗液：0.62g NaH2PO4-2H2O+5.73gNa2HPO4-12H2O+9gNaCl ,蒸餾水定容至1000ml.+0.5ml 土溫20

樣品飼料前處理：（稀釋倍數(shù)：20）

1、稱1g飼料樣品，加入4ml甲醇；

2、震蕩1min，加入0.1g氯化鈉；

3、4000轉(zhuǎn)離心5min；

4、取上清液0.2ml加入到0.8ml 20mMPBS中，混勻。

5、取150ul測定。

檢測：

1、先將三聚氰胺酶標(biāo)記物50ul，樣品150ul及標(biāo)準(zhǔn)150ul加入到已經(jīng)包被有三聚氰胺抗體的微孔中開始反應(yīng)。

2、在30分鐘的孵育過程中，樣品萃取物中的三聚氰胺與三聚氰胺酶標(biāo)記物競爭結(jié)合微孔中的三聚氰胺抗體；

3、孵育30分鐘后用清洗液洗掉小孔中所有沒有結(jié)合的三聚氰胺及三聚氰胺酶標(biāo)記物。清洗四次后，放在桌上用吸水紙吸掉微孔板里多余的水份；

4、清洗結(jié)束后，每孔中加入100ul清澈的底物溶液，結(jié)合的酶標(biāo)記物將無色的底物轉(zhuǎn)化為藍(lán)色的物質(zhì)。

5、孵育30分鐘后加入100ul 停止液STOP停止此反應(yīng)，根據(jù)各孔顏色深淺進(jìn)行數(shù)據(jù)讀取。依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)的顏色得出樣品中三聚氰胺的的濃度值

結(jié)果分析：

1、半定量的結(jié)果是由樣品的吸光率與標(biāo)準(zhǔn)的吸光率的簡單對比而來判定：樣品的顏色比標(biāo)準(zhǔn)的顏色淺，則三聚氰胺的濃度比標(biāo)準(zhǔn)樣的濃度高，樣品的顏色比標(biāo)準(zhǔn)的顏色深則三聚氰胺的濃度比標(biāo)準(zhǔn)樣的濃度低。

2、定量分析需要繪制以標(biāo)準(zhǔn)樣的吸光率為X軸,以標(biāo)準(zhǔn)樣的濃度的半對數(shù)為Y軸的曲線圖。依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)樣。

吸光率的點(diǎn)畫成一直線,如此樣品的光吸收率可在線上找到,與此相對應(yīng)的Y軸則為樣品的濃度,樣品光吸收率。

范圍應(yīng)比標(biāo)準(zhǔn)樣的zui底范圍高,比zui高范圍低, 即可說明此樣品中三聚氰胺的含量大于500ppb或小于20ppb。

特點(diǎn)：

本產(chǎn)品為酶聯(lián)免疫吸附測定法（ELISA）法，靈敏度高、檢測成本低，可適用于生產(chǎn)及檢驗(yàn)單位大批量快速篩查。