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革蘭氏陽性菌細胞壁結構致密，肽聚糖層厚，脂質含量少，結晶紫及媒染劑進入細胞內，形成結晶紫—碘復合物。脫色過程中，雖然溶解細胞壁脂質成分形成小孔。但脫水作用使細胞壁收縮又構成屏障，阻止結晶紫—碘復合物被乙醇溶出，細菌保持紫色。革蘭氏陰性菌細胞壁疏松，肽聚糖層較薄，脂質含量高，乙醇溶解脂質，細胞壁通透性增高，結晶紫—碘復合物溶出，使細菌脫色，經復染細菌呈紅色。

配方：

1. 結晶紫染色液：

結晶紫 1g

95%乙醇 20ml

1%草酸銨水溶液 80ml

2. 革蘭氏碘液：

碘 1g

碘化鉀 2g

蒸餾水 300ml

3. 95%酒精：

4. 沙黃復染液

沙黃 0.25g

95%乙醇 10ml

蒸餾水 90ml

使用說明：

1．將涂片在火焰上固定，滴加結晶紫染色液，染1min，水洗。

2．滴加革蘭氏碘液，作用1min，水洗。

3．滴加脫色酒精，約30s;或將脫色酒精滴滿整個涂片，立即傾去，再用脫色酒精滴滿整個涂片，脫色10s。

4．水洗，滴加沙黃復染液，復染1min。水洗，待干，鏡檢。

結果判斷：

革蘭氏陽性菌	革蘭氏陰性菌
紫色	紅色

貯存條件：常溫，避光貯存。

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