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改良番茄汁瓊脂培養基：

用途：

用于乳酸菌飲料中乳酸菌的菌落計數（GB/T16347-1996，GB/T4789.35-2003）。

原理：
番茄汁可提供碳源、蛋白質等營養物質；牛肉膏粉和酵母膏粉提供氮源、維生素和生長因子；葡萄糖和乳糖為可發酵糖類提供碳源；磷酸氫二鉀為緩沖劑；吐溫-80和乙酸鈉為培養各種乳酸菌提供生長因子，其成分還能抑制某些雜菌；瓊脂是培養基的凝固劑。

配方（每升）：

酵母膏粉	5g
牛肉膏粉	10g
乳糖	20g
葡萄糖	2g
磷酸氫二鉀	2g
吐溫-80	1g
乙酸鈉	5g
瓊脂	15g

zui終pH 6.8±0.2

使用方法：
1、切碎洗凈的新鮮番茄，放入三角瓶，置4℃冰箱8～12h，取出后用紗布過濾。稱取本品60g，加入950 ml蒸餾水或去離子水和50ml番茄汁，攪拌加熱煮沸至*溶解，校正pH后分裝三角瓶，121℃高壓滅菌15min。

2、無菌操作將經過充分搖勻的檢樣25g（或25mL），放入含有225mL滅菌生理鹽水的滅菌廣口瓶內，振搖均勻，即為1：10稀釋液，依次做1：100、1：1000……稀釋。

3、選擇2-3個合適的稀釋度，分別在做10倍遞增稀釋的同時，吸取1mL稀釋液于滅菌平皿中，每個稀釋度做2個平皿。將培養基涼至50℃左右，將培養基注入平皿中約15mL，待瓊脂凝固后，翻轉平板，置于36±1℃溫箱中培養72±3h。選擇菌落數在30-300個之間的平皿進行計數。計后，隨機挑取5個菌落數進行革蘭氏染色，顯微鏡檢查并做過氧化氫酶試驗。革蘭氏陽性，過氧化氫酶陰性，無芽孢的球菌或桿菌可定為乳酸菌。根據證實為乳酸菌落計算出該皿內的乳酸數，然后乘其稀釋倍數即得每毫升樣品中乳酸菌數。例如，檢樣10-4的稀釋液在改良TJA培養基平板上，生成的可疑菌落為35個，取5個鑒定，證實為乳酸菌的是4個，則1 mL檢樣中乳酸菌數為：

4、

35× — ×104＝2.8×105

質量控制：

下列菌株接種后于36±1℃培養72h結果如下：

菌名	菌號	生長狀況	生長特征
保加利亞乳桿菌	As1.1482	良好	平皿底為黃色，菌落中等大小，微白色，濕潤，邊緣不整齊，直徑3±1mm，如棉絮團狀菌落
乳鏈球菌		良好	平皿底為黃色，菌落光滑，微白色，濕潤，邊緣整齊

貯存：貯存于避光、陰涼干燥處。

參考文獻：

GB/T4789.35－2003 中華人民共和國國家標準食品衛生微生物檢驗乳酸飲料中乳酸菌檢驗

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