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影響ASD光譜儀讀數(shù)不穩(wěn)定的因素是什么
ASD光譜儀是指通過測定物質(zhì)的波長在光區(qū)范圍內(nèi)光的吸收度，對物質(zhì)進行定性和定量分析的儀器。由光源、單色器、樣品池、檢測器和記錄儀組成。光譜主要來源于分子振動，由于每種物質(zhì)的結(jié)構(gòu)不同，就會出現(xiàn)不同的吸收頻率，因此產(chǎn)生具有一定特征的光譜，由此可以進行定性、定量分析和結(jié)構(gòu)剖析。由于光區(qū)的不同，光譜法分為近光譜、中光譜和遠光譜，其中分子振動的基頻主要位于中區(qū)。因此中區(qū)在定性與定量分析方面準(zhǔn)確性更高。
根據(jù)信號的采集方式光譜可分為透射光譜、反射光譜和光聲光譜，這些光譜都是吸收光譜，但具有不同的特點，如透射光譜多用于定性分析，很難用于定量分析，而反射光譜和光聲光譜均可以用于定性和定量分析。光譜法具有快速、樣品需要量少、測定方便和不破壞樣品等特點，因而在土壤學(xué)研究中具有廣泛應(yīng)用，如土壤有機質(zhì)和礦物的結(jié)構(gòu)與組成。
ASD光譜儀讀數(shù)不穩(wěn)定可能是實驗者頭痛的問題。靈敏度越高的儀器，表現(xiàn)出的吸光值漂移越大。事實上，設(shè)計原理和工作原理，允許吸光值在一定范圍內(nèi)變化，即ASD光譜儀有一定的準(zhǔn)確度和精確度。
1、核酸本身物化性質(zhì)：溶解核酸的緩沖液的pH值、離子濃度等在測試時，離子濃度太高也會導(dǎo)致讀數(shù)漂移，因此建議使用pH值一定、離子濃度較低的緩沖液(如TE)可大大穩(wěn)定讀數(shù)。核酸的吸光值受pH值和緩沖液離子濃度影響。只有在一定的pH值和低離子濃度的條件下(如10mMTris-HClpH8.0)，才能得到精確的檢測結(jié)果。水的pH值不穩(wěn)定，可能導(dǎo)致檢測誤差。一些緩沖液在紫外范圍內(nèi)存在自身吸收，為了確保準(zhǔn)確測量，請使用與懸浮或洗脫樣品時相同的緩沖液。
2、樣品的稀釋濃度：樣品的稀釋濃度同樣是不可忽視的因素，由于樣品中不可避免存在一些細小的顆粒，尤其是核酸樣品。這些小顆粒的存在干擾測試效果。為了較大程度減少顆粒對測試結(jié)果的影響，要求核酸吸光值至少大于0.1A，吸光值在0.1-1.5A。在此范圍內(nèi)，顆粒的干擾相對較小，結(jié)果穩(wěn)定。從而意味著樣品的濃度不能過低，或者過高(超過光度計的測試范圍)。
3、ASD光譜儀操作因素：如混合要充分，否則吸光值太低，甚至出現(xiàn)負值;混合液不能存在氣泡，空白液無懸浮物，否則讀數(shù)漂移劇烈;必須使用相同的比色杯測試空白液和樣品，否則濃度差異太大;換算系數(shù)和樣品濃度單位選擇一致;不能采用窗口磨損的比色杯;樣品的體積必須達到比色杯要求的較小體積等多個操作事項。