二氧化碳培養箱的正面有操作盤，盤上設有電源開關，溫度調節器(手動式和液晶顯示盤)，CO2注入開關，CO2調節旋扭，濕度調節旋扭，溫度顯示盤，CO2顯示盤和濕度顯示盤，二氧化碳樣品孔(用于抽取箱內的樣品，以檢測箱內的CO2是否達到顯示盤上所顯示的含量)和報警裝置(超溫報警燈)
(1)二氧化碳培養箱應放置于位置比較平穩，并遠離熱源的地方，以防止溫度波動和微生物的污染。
(2)在接通電源前，應按照使用說明書，在二氧化碳培養箱內加入一定的蒸餾水(所加入的水加入一定量的消毒劑，詳見說明書)，以免燒壞機器。
(3)當水加到一定量后，報警燈亮，即停止加水，打開電源開關，即開始加溫，將溫度控制器調到所需溫度。
(4)當溫度達到所需溫度時，則自動停止加熱，超過所需溫度時，超溫報警燈亮，并發出報警聲。
(5)二氧化碳培養箱所用的CO2可以用液態CO2或氣體，無論用哪種CO2給供的管子不能太變曲，以保證氣體的暢通。一般選用CO2鋼瓶，接上壓力控制表即可。
(6)CO2含量的調零在箱內溫度和濕度穩定后(一般須三天)，旋動CO2調節旋扭，使顯示盤的數字調到
0.00，過5分鐘后如需要再重復調整，直到顯示盤上的讀數穩定為止。打開CO2注入開關(注入燈亮)，將CO2設定值調到所需濃度，使濃度達到設定值濃度后(注入燈熄滅)，并至少維持10分鐘。此后則由CO2控制器自動調節箱內的CO2含量。
(7)二氧化碳培養箱濕度的調整先將濕度調節旋扭按下，再將濕度調節旋扭轉動至所需培養濕度，此后由濕度調節器自動調整濕度。