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熒光分光光度計測量熒光強度為什么要設定兩個波長?

閱讀:12780      發布時間:2021-7-27
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   熒光分光光度計使用的時候存在兩種模式,一種是固定Ex掃Em,一種是固定Em掃Ex,將一個范圍的Ex(如230nm~300nm)的ex所對應的Em組合起來就是3D熒光。簡單的說,Ex是激發,也就是手電筒(光源),固定Ex的意思就是只用某個波長,如254nm作為光源來激發樣品,觀察的是固定該光源時,樣品在不同波長位置所展現的熒光強度(即em),簡單的說,就是看光屏上的強度。這一模式是為了了解待測物在哪個波段有光致發光現象。而Em,也就是被激發的光(就是接收器上接收到的),這是在知道了我的樣品在哪一個位置發光(被激發后發光)后,或者說,選定一個我需要的發光位置后,看看哪一個波長的光源對樣品激發效果更好。
 
  一個是激發波長,另一個是發射波長。你得到一個新的樣品,你不知道它的激發波長,發射波長,那么辦呢。在前輩總結下,熒光分光光度計發現樣品的發射波長波動小,所以先確定發射波長。沒有激發波長激發,發射波長也得不到。一般熒光樣品的激發波長在300-410nm之間,你們可以查看同類物質的激發波長是多少,總結一下,在300—410nm中,先確定一個激發波長。在激發波長的激發下,出現熒光強度變化圖譜,熒光強度最大的那個點所對應的發射波長,即圖的橫坐標上的值,為發射波長。以發射波長確定最佳激發波長原則,熒光分光光度計以上面的發射波長為激發波長,再次得到一個光譜圖。在光譜圖中,同樣有一個最大熒光強度,這個強度所對應的發射波長就是你要找的最佳激發波長。所以會有兩條圖線,就有兩個波長。

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