QQ交談
您所在位置：產品搜索
請輸入產品關鍵字：
聯系方式
地址：上海市嘉定區澄瀏公路52號
郵編：200000
聯系人：王小姐
電話：021-59989018
傳真：
手機：15201736385
售后電話：15201736385
留言：發送留言
個性化：www.shyskits.com
網址：www.shyskits.com
商鋪：http://www.wanmeizu.com/st175729/
郵編：200000
聯系人：王小姐
電話：021-59989018
傳真：
手機：15201736385
售后電話：15201736385
留言：發送留言
個性化：www.shyskits.com
網址：www.shyskits.com
商鋪：http://www.wanmeizu.com/st175729/
技術文章
大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤 PC-12分化細胞操作步驟
點擊次數：180 發布時間：2025-6-25
大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤 PC-12分化細胞操作步驟
分化誘導階段
當細胞密度達到60%-70%匯合時，更換為含1%馬血清和100ng/ml NGF（神經生長因子）的低血清分化培養基。注意保持培養基pH值在7.2-7.4之間，每2天更換新鮮分化培養基。此階段需特別注意：①使用經0.1%多聚賴氨酸預處理的培養皿增強細胞貼附；②培養箱濕度維持在95%以避免培養基蒸發造成的滲透壓變化。
形態學觀察
分化第3天起，在倒置相差顯微鏡下可觀察到特征性改變：胞體逐漸伸長，從圓形上皮樣向梭形神經元樣轉變，并開始伸出細長突起。建議每日拍攝固定視野的時序照片，使用ImageJ軟件量化神經突長度（≥2倍胞體直徑視為有效突起）。典型分化過程約需7-10天，當50%以上細胞呈現明顯神經突時可判定分化成功。
功能驗證
分化完成后可通過以下方法驗證：①免疫熒光檢測神經元特異性烯醇化酶（NSE）和β-微管蛋白III表達；②鈣成像檢測細胞對高鉀溶液的鈣響應；③采用微電極陣列（MEA）記錄自發放電活動。注意實驗需設置未分化細胞對照組。
?
注意事項
1. 嚴格把控NGF活性：分裝儲存于-80℃，避免反復凍融
2. 分化期間禁止使用胰蛋白酶消化，需換液時采用溫和的PBS沖洗
3. 出現過度聚集現象時，可加入2μM胞嘧啶-β-D-阿拉伯呋喃糖苷抑制非神經元細胞增殖。