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美國ABI Veriti 96 PCR儀操作方法

時間:2019/1/7閱讀:3227
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PCR技術是一種分子生物學技術,用于在幾個數量級上擴展一段DNA的一個或幾個拷貝,復制數千到數百萬個DNA序列。作為一種廉價但可靠的方法,能夠重復復制DNA的聚焦片段。ABI公司的PCR儀器在行業內受到普遍的歡迎。今天小編 Veriti 梯度PCR儀為例就為您簡單介紹一下具體的操作方法。

步驟:

1、打開PCR儀的熱蓋,插入0.2ml的樣品管,蓋好熱蓋;

2、打開PCR儀的電源,儀器程序開始初始化,需等待幾分鐘;

3、初始化完成后,顯示主菜單;

4點“Browse/New Methods”,進入PCR程序列表;

5、可以直接點一個PCR程序,選擇“Start Run”運行;點右邊的符號,可以選擇不同的文件夾。如要新建一個PCR程序,點“New”,出現PCR程序;

6、添加一段程序:點中上方的“Stage”位置,該位置變紅;再點“Add”,軟件將加入一段新的程序;

7、修改循環數、溫度、時間:點中循環次數、溫度或時間位置,下方出現數字鍵。依次點數字鍵,出現合適數字后,點“Done”確定;

8、增加一個步驟:點“Step”位置,該位置變紅;再點“Add”,軟件將加入一個新的步驟;

9、刪除一個步驟:點“Step”位置,在點“Delete”,軟件將該步驟刪除;

10、建立梯度模式:點中一個步驟,再點“Option”鍵;

11、點“VeriFlex step”,出現梯度創建窗口;

輸入6個梯度溫度,溫度下方的“1-2”是指對應的1、2兩行加熱孔,全部輸好后,點“Done”確定。注意:相鄰的兩個梯度溫度之差較為大不能*過5℃!

12、建立漸變模式:

1)點中一個步驟,再點“Option”鍵;

2)點“Auto Delta”,出現漸變模式創建窗口;

點“Staring Cycle”,輸入起始循環數;點“Delta Temperature”,輸入溫度變化值;點“Delta Time”,輸入時間變化值。漸變模式適用于touchdown PCR,可以提高PCR反應的特異性。例:輸入起始循環數為2,溫度變化值為+0.5℃,時間變化值為+5s,則表示從第2個循環開始,每循環一次升溫0.5℃,時間增加5s。
13、增加暫停步驟:

1)點中一個步驟,再點“Option”鍵;

2點“Pause”;

輸入暫停的起始位置,暫停間隔和暫停時間,點“Done”確定。上圖表示每隔10個循環暫停10s,在10個循環的第1個循環之前暫停。

14、編輯PCR程序完成后,點“Save”保存;

點“Run Method”,輸入PCR程序名稱;點,選擇保存PCR程序的文件夾(如果要保存在USB文件夾中,需要先插U盤)。再輸入反應體積和熱蓋溫度(這兩項在運行程序時可以修改)。點“SaveδExit”確定;
15、回到PCR程序列表界面,選擇新建的PCR程序;

16、點“Start Run”,出現運行參數設置窗口;

17、儀器運行選中的PCR程序,顯示運行監視窗口;

18、暫停運行:
點“Pause Run”,儀器暫停,出現暫停選項欄;

“Remaining Time”顯示暫停剩余時間,“Elapse Time”顯示已暫停時間。
如果需要修改暫停時間,點,輸入時間值,點“Done”確定;點“Resume Run”,結束暫停,繼續運行PCR程序。
19、終止運行:點“Stop”可以終止整個PCR程序;
20、反應報告:
PCR程序結束后,儀器會自動生成反應報告,顯示當次反應的各項指數。該報告可以保存和打印;

21、PCR反應結束后,打開熱蓋,取出樣品,關閉儀器電源。并開蓋放置,使熱蓋和加熱模塊正常降溫。

以上就是ABI VeritiPCR儀的操作步驟,希望對各位有所幫助。如果您有任疑問,歡迎您咨詢上海旦鼎,期待給您一個滿意的回復。

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