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clsgmbh不培養的支原體檢測說明書

2022-6-29  閱讀(1025)

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clsgmbh不培養的支原體檢測說明書

產品概述

細胞系、細胞組分、生長和冷凍培養基、細胞培養服務等等。

 

Mycoplasma testing without c*tion

 

 

產品編號 選項
900159 不培養的支原體檢測
900159.1 培養14天的支原體檢測

 

 

產品信息“無需培養的支原體檢測”

支原體是小的原核生物,它們太小而無法在顯微鏡下看到,并且不能被普通抗生素試劑消除。支原體可能會影響細胞系的細胞生長、增殖和形態,從而可能導致不可靠的實驗結果。大約 15% 到 35% 的實驗室細胞培養物被支原體污染。因此,建議經常控制以保證無支原體的環境。 

分析方法

CLS 提供支原體檢測的短期和長期測試。在前者中,樣品在到達后立即進行測試,而在后者中,開始細胞培養并在無抗生素培養 14 天后對細胞進行測試。支原體檢測是使用兩點檢測系統進行的,該系統包括 PlasmoTest™ - 支原體檢測試劑盒 (Invivogen) 和 Certus QC - mycoADVANCED 檢測試劑盒 (Certus)。

比色報告基因測定

該測試是基于細胞的比色測定。在支原體存在的情況下,報告細胞系會誘導信號級聯反應,從而觸發培養基中的顏色從紅色變為藍色。該測定在 96 孔多孔板中進行。在微孔板分光光度計中檢測 620-655 nm 的信號。檢測到所有支原體和膽原體物種,以及細胞培養物中的其他污染物,例如細菌。結果顯示在下面的條形圖中:

 

 

等溫擴增

等溫擴增是一種基于支原體特異性 DNA 的等溫擴增與使用 DNA 嵌入染料的實時檢測相結合的快速且可靠的測試。該測定法可以檢測出占污染 >95% 的六種常見的物種:口腔分枝桿菌、豬鼻分枝桿菌、精氨酸分枝桿菌、發酵分枝桿菌、人型分枝桿菌和萊氏分枝桿菌。由于序列同源性,還將檢測到其他支原體物種(肺炎支原體、雞毒支原體和滑膜支原體)。為了確定樣品是支原體陽性還是陰性,需要研究解鏈溫度 (Tm)。不同熔化溫度的結果如下所示: 

 

 

出色地

顏色

樣品名稱

溫度 (°C)

結果

1

紫色的

樣本

94,65

消極的

2

 粉色的 

陽性對照

87,37

積極的

3

 綠松石

陰性對照

94,16

消極的

等溫擴增結果的評估

所有熔化溫度及其各自的測試結果解釋如下:

樣本

以°C為單位的熔化溫度(Tm)

負控(NC)/內控(IC)

94.8 +/- 0.2

陽性對照 (PC)

87.9 +/- 0.2 

支原體陽性

- 支原體DNA擴增

87.0 - 89.2

支原體陽性

- 被少量支原體污染;支原體 DNA 的擴增和內部對照 

87.0 - 89.2 和 

95.0 +/- 0.2

支原體陰性

- 擴大內部控制

95.0 +/- 0.2

被其他細菌污染或非特異性 
 擴增

           89.5 - 94.0

 

比色報告分析結果的評估

如果測試呈陽性,則存在 5*10 2 – 5*10 5范圍內的菌落形成單位 (CFU) 。不同支原體種類的 CFU/ml 詳細列表如下所示:

 支原體種類

靈敏度 CFU (ml)

A.laylawii

2.5*10 3

M. arginini 

2.0*10 3

發酵菌 

5.0*10 2

M. hyorhinis

7.0*10 2

 口腔 桿菌

5.0*10 5

 

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