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KGA219-7-AAD染色試劑盒
  • KGA219-7-AAD染色試劑盒
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貨物所在地:江蘇南京市

更新時間:2025-06-24 21:00:07

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7-AAD染色試劑盒

 7-AAD染色試劑盒
(Cell Apoptosis 7-AAD Detection Kit)
Cat numberKGA         For Research Use Only
Store at4 for one year
Expire date

一、試劑盒說明
7-AAD (7-amino-actinomycin D)是一種核酸染料,它不能通過正常質膜,隨著細胞凋亡、細胞死亡過程,質膜對7-AAD的通透性逐漸增加,結合細胞凋亡中DNA的有控降解,在合適波長激發光的激發下可發出明亮的紅色熒光,通過7-AAD標記DNA的強弱,將細胞分為三群:7-AAD強為死亡細胞,7-AAD弱是凋亡細胞,7-AAD-為正常活力細胞。7-AAD同PI 有著相似的熒光特性,但其發射波譜較PI窄,對其他檢測通道的干擾更小,在多色熒光分析中是PI 的*替代品,可與Annexin V-EGFP/FITC/PE聯合使用。
本試劑盒適用于培養的細胞染色,可應用于熒光顯微鏡、激光共聚焦計或流式細胞儀檢測。
二、試劑盒組份
組分
KGA219100 assays
儲存條件
7-AAD染液
0.5 mL
4,避光
10×Assays Buffer
5 mL
4
        1×Assays Buffer工作液配制:用前將10×Assays Buffer 用雙蒸水稀釋10倍。
三、試劑盒以外自備儀器和試劑
流式細胞儀、激光共聚焦熒光顯微鏡:激發波長546nm,發射波長647 nm
微量移液器、1.5m L Microtube、載玻片
四、使用注意事項
1.   微量試劑取用前請離心集液。
2. 7-AAD避光保存及使用。
3. 7-AAD為潛在致癌物,操作時請采取防護措施,穿防護服、戴手套等。
4. 本試劑盒適用于檢測活細胞,流式細胞儀檢測時,細胞數量不以應低于1×105,不*用于檢測組織樣本。
五、操作方法
1.   懸浮細胞離心(2000rpm離心5min)收集;貼壁細胞用胰酶消化收集用PBS洗滌細胞二次(2000rpm離心5min)收集1~5×105細胞;
2.   加入5μL 7-AAD染液,混勻;室溫、避光、反應515min
3.   加入500μL1×Assays Buffer懸浮細胞;
4.   請在1 hour內,進行下述熒光顯微鏡或流式細胞儀的觀察和檢測。
A. 熒光顯微鏡觀察
1.   滴一滴上述染色后的細胞懸液于載玻片上,并用蓋玻片蓋上細胞;
2.   對于貼壁細胞來說,也可直接用蓋玻片來培養細胞并誘導細胞凋亡;
(1)         將細胞于蓋玻片上生長,用適當的凋亡誘導劑誘導細胞凋亡,并設立陰性對照組;
(2)         PBS洗滌細胞兩次;
(3)         500μL 1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液,混勻;
(4)         將上述溶液滴加于蓋玻片表面,使長有細胞的蓋玻片表面均勻覆蓋;
(5)         避光、室溫反應5 min
3.   將蓋玻片倒置于載玻片上,于熒光顯微鏡下觀察激發波長546nm,發射波長647 nm7-AAD熒光信號呈紅色。
B.  流式細胞儀分析
用流式細胞儀檢測,激發波長Ex=546 nm; 發射波長Em=647 nm
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測。

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