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吖啶橙染色試劑盒
  • 吖啶橙染色試劑盒
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貨物所在地:江蘇南京市

更新時間:2025-06-24 21:00:07

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吖啶橙染色試劑盒

細胞凋亡吖啶橙染色檢測試劑盒
 (Cell Apoptosis Acridine Orange Detection Kit)
Cat numberKGA             For Research Use Only
Store at4 for one year
Expire date

一、試劑盒說明
吖啶橙(Acridine Orange,AO一種熒光色素,其檢測激發(fā)濾光片波長488nm。阻斷濾光片波長515nm。它與細胞中DNARNA結(jié)合量存在差別,可發(fā)出不同顏色的熒光,與DNA結(jié)合量少發(fā)綠色熒光,與RNA結(jié)合量多發(fā)桔黃色或桔紅色熒光。該染料具有膜通透性,能透過細胞膜,使核DNA和RNA染色。因此,在熒光顯微鏡下觀察,吖啶橙可透過正常細胞膜,使細胞核色或黃綠色均勻熒光;而在凋亡細胞中,因染色質(zhì)固縮或斷裂為大小不等的片斷,形成凋亡小體。吖啶橙使其染上致密濃染的黃綠色熒光,或黃綠色碎片顆粒;而壞死細胞黃熒光減弱甚至消失。吖啶橙AO常與溴化乙啶EB合用雙染,因EB只染死細胞使之產(chǎn)生桔黃色熒光,由此可區(qū)分出正常細胞、凋亡細胞及壞死細胞。
二、試劑盒組份
組分
KGA213100 assays
儲存條件
吖啶橙染液
500μL
4℃,避光
10×Buffer A
10 mL
4℃
: 1×Buffer A配制:用前用雙蒸水將10×Buffer A稀釋10倍。
三、試劑盒以外自備儀器和試劑
熒光顯微鏡、低速離心機、微量移液器、1.5m L Microtube、載玻片、蓋玻片
四、使用注意事項
    吖啶橙染液有毒,操作時請戴手套。
五、操作方法
  1吖啶橙單染
     (1)收集細胞,1×Buffer A洗一次,加適量的1×Buffer A重懸,調(diào)節(jié)細胞濃度約為106/mL;
     (2)吸取95μL細胞懸液和5μL吖啶橙染液,輕輕混勻;
(3)室溫避光染色15min后,滴加于載玻片上,加蓋玻片;
(4)熒光顯微鏡,激發(fā)濾光片波長488nm。阻斷濾光片波長515nm觀察,計數(shù)、拍照。
正常細胞——細胞被均勻染成黃綠色熒光;凋亡細胞——染色質(zhì)濃縮,細胞核碎裂成點狀,被染成大小不一、致密濃染的綠色顆粒
2. 與EB雙染
     (1)收集細胞,1×Buffer A洗一次,加適量的1×Buffer A重懸,調(diào)整細胞濃度約為106/mL;
     (2)吸取90μL細胞懸液,加入EB染液和吖啶橙染液各5μL,輕輕混勻;
(3)室溫避光染色15min后,滴加于載玻片上,加蓋玻片;
(4)熒光顯微鏡,濾光片515nm觀察,計數(shù)、拍照。
正常細胞——細胞被均勻染成綠色熒光;     壞死細胞——細胞桔黃色熒光;
凋亡細胞——染色質(zhì)濃縮,細胞核碎裂,被染成大小不一、致密濃染的黃綠色顆?;蛞姲|(zhì)芽狀突起。
     (5)計算細胞凋亡率和死亡率
       

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