一） 試劑盒名稱：大腸菌群測試盒——國標九管發酵法 
   （二） 試劑盒采用的測定方法：GB/T4789.3-2003乳糖膽鹽發酵法
   （三） 試劑盒的檢驗步驟：檢驗步驟與結果判斷按GB/T4789.3-       2003中“7. 操作步驟”進行；
   （四） 試劑盒結構：分前后兩排透明方管，每個方管里面有一個特別設計的產氣窗，前排三個大方管相當于雙料乳糖膽鹽培養基，后排六個小方管相當于單料乳糖膽鹽培養基，但成份已進一步濃縮；當加入稀釋的待檢樣液或原液后，每管內均達到國標所要求的培養基濃度，大腸菌群發酵培養基產酸產氣，培養基變黃，產氣窗內產生氣泡,結果觀察一目了然; 試劑盒采用無菌包裝，供用戶一次性使用；
    （五）試劑盒的特點：  
    （1）對大腸菌群測定的方法仍然是GB/T4789.3-2003中乳糖膽鹽發酵法；
    （2） 省去了繁雜的試劑配制、分裝、消毒以及收尾工作，提高了工作效率，符合現代檢驗向快速、準確方向發展的要求；
    （3） 試劑盒占用空間小，減少玻璃器皿及培養箱的周轉；
    （六）保存方法：常溫下避光保存（*保存：0℃—8℃），有效期一年；
    （七）應用范圍：食品、瓶裝或桶裝飲用（純凈）水；

大腸菌群測試盒操作步驟

準備測試盒
●.排氣泡：將測試盒前后分別以大約45度角傾斜，必要時可輕輕
用力在桌面上敲擊數下，以排除產氣窗內氣泡；并將樣品編號填寫在盒蓋編號位置；
●.開口：將測試盒平放在桌面上，左手揭開活動盒蓋，右手持經火焰消毒的開口器，冷卻后在測試盒每管中間位置連續穿刺開口；

檢樣稀釋
      以無菌操作將檢樣25mL（或g）放于含有225mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶內（瓶內予置適當數量的玻璃珠）或滅菌乳缽內，經充分振搖或研磨做成1：10的均勻稀釋液。固體檢樣用均質器，以8000～10000r/min的速度處理1min，做成1：10的均勻稀釋液。
     用1mL來菌吸管吸取1：10稀釋液1mL，注入含有9mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的試管內，振搖試管混勻，做成1：100的稀釋液。
另取1mL滅菌吸管，按上條操作依次做10倍遞增稀釋液，每遞增稀釋一次，換用1支1mL滅菌吸管。

乳糖發酵試驗
     將待檢樣品稀釋液（或液體飲料食品原液）接種于大腸菌群測試盒發酵管內，前排三大管內接種1：10的均勻稀釋液（或液體飲料食品原液）10mL，后排共六管，其中三管接種1：10的均勻稀釋（或液體飲料食品原液）1mL，另外三管接種1：100的稀釋液（或液體飲料食品1：10的均勻稀釋液）1mL，將接種好的測試盒放入托盤內，置36±1℃溫箱內，培養24±2h后，如果培育基變黃，產氣窗內有氣泡者，為產酸產氣，如所有乳糖膽鹽發酵管都不產酸產氣，則可報告為大腸菌群陰性，如有產酸產氣者，則進行確正試驗。

確證試驗：兩種方法任選其一
    1）復發酵分離鑒定：
    1.1）分離培養
將產氣的發酵管分別轉種在伊紅美藍瓊脂平板上，置36±1℃溫箱內，培養18～24h，然后取出，觀察菌落形態，并做革蘭氏染色和證實試驗。
    1.2）證實試驗
在上述平板上，挑取可疑大腸菌群菌落1～2個進行革蘭氏梁色，同時接種乳糖發酵管，置36±1℃溫箱內培養24±2h，觀察產氣情況。凡乳糖管產氣、革蘭氏梁色為陰性的無芽胞桿菌，即可報告為大腸菌群陽性
    2）熒光法鑒定：
用接種針粘取產酸產氣的發酵液接種于熒光鑒定管內，每管接種3針，將接種后的熒光鑒定管置于36±1℃培養箱內培養18h—24h。
將培養后的熒光鑒定管置于暗處，用波長366nm的紫外光燈照射，如顯藍色熒光，為大腸菌群陽性管；如未顯藍色熒光，則為大腸菌群陰性管。

結果報告：
   根據大腸菌群陽性管數，查MPN表，報告每100ml（g）食品中腸菌群MPN值
。
注意事項：
●在培育箱內拿出裝有測試盒的托盤以及觀察結果時，應平拿平放，以免由于測試盒的傾向而將陽性管產氣窗內氣泡排出，而影響結果.

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