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熒光定量PCR耗材的使用和選擇

閱讀:2059        發(fā)布時(shí)間:2021-4-9

高通量的96孔PCR板和8聯(lián)管是在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction ,PCR)中,主要作為參與擴(kuò)增反應(yīng)的引物、Taq DNA聚合酶、dNTP、模板核酸、Mg、緩沖液等的承載物。醫(yī)療級(jí)聚丙烯(PP)材質(zhì)因其高的純凈度和穩(wěn)定性,能更好適應(yīng)PCR反應(yīng)過程中反復(fù)高低溫設(shè)定,并且能夠?qū)崿F(xiàn)高溫高壓滅菌操作,常常被用于PCR耗材的生產(chǎn)。隨著熒光定量PCR技術(shù)的普及,該技術(shù)被廣泛用于遺傳、生化、免疫、醫(yī)藥等領(lǐng)域,不僅應(yīng)用于基因分離、克隆和核酸序列分析等基礎(chǔ)研究,還可用于疾病的診斷或任何有DNA,RNA的研究領(lǐng)域。

如何正確使用96孔PCR孔板

  • PCR板有透明和乳白色可選,其中乳白色更適合用于頂部采集熒光信號(hào)的新型熒光定量PCR儀(如伯樂CFX系列,ABI 7500fast 以上型號(hào), Roche 480系列),但如果熒光定量PCR儀是底部光源的,則應(yīng)選擇透明的。

  • PCR板根據(jù)裙邊設(shè)計(jì)又可分為無裙邊、半裙邊和全裙邊三種設(shè)計(jì)模式,不同廠家的熒光定量PCR儀會(huì)設(shè)計(jì)不同的切角或邊緣凸起,請(qǐng)選擇適合該P(yáng)CR儀的板子。

  • PCR板又分100ul體積(矮板)和200ul體積(高板),根據(jù)機(jī)型的不同選擇,選擇不同高度孔板,避免高度錯(cuò)誤對(duì)機(jī)器造成破壞和加熱不均導(dǎo)致數(shù)據(jù)失真。

  • 當(dāng)使用96孔板做熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)的時(shí)候,推薦使用光學(xué)膜代來密封反應(yīng)孔。正確的封膜方法是:先沿著96孔板的縱向壓膜,然后橫向,最后沿著板的邊緣按壓使之密封。具體手法見下面圖示:

  • 加樣后會(huì)在管壁上飛濺一些小液滴,另外反應(yīng)體系內(nèi)也會(huì)有一些氣泡,需要離心去掉掛壁液滴和氣泡。請(qǐng)使用的微孔板離心機(jī)解決上述問題。

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