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組織勻漿的制備方法簡介
閱讀：1801 發布時間：2023-8-9
1、取組織塊（0.2g~1g）最少可到2～5mg，在冰冷的生理鹽水中漂洗，除去血液，濾紙拭干，稱重，放入5或10ml的小燒杯內
2、用移液管量取預冷的勻漿介質（ph7.4,0.01mol/L Tris-HCL, 0.0001MOL/LEDTA-2Na,0.01mol/L蔗糖0.8％的氯化鈉溶液）或者用0.86％冷生理鹽水，勻漿介質或生理鹽水的體積總量應該是組織塊重量的9倍，用移液管或移液器取總量的2/3的勻漿介質或生理鹽水于燒杯中，用眼科小剪盡快剪碎組織塊（天然時操作要在冰水浴中進行，將盛有組織的小燒杯放入冰水中）。
3、勻漿的方式有多種：手工勻漿、機器勻漿、超聲勻漿、反復凍融。
手工勻漿：將剪碎的組織倒入玻璃勻漿管中，再將剩余的1/3勻漿介質或生理鹽水沖洗殘留在燒杯中的碎組織塊，一起倒入勻漿管中進行勻漿，左手持勻漿管將下端插入盛有冰水混合物的器皿中，右手將搗桿垂直插入套管中，上下轉動研磨數十次（6～8分鐘），充分研碎，使組織勻漿化。
手工勻漿：將剪碎的組織倒入玻璃勻漿管中，再將剩余的1/3勻漿介質或生理鹽水沖洗殘留在燒杯中的碎組織塊，一起倒入勻漿管中進行勻漿，左手持勻漿管將下端插入盛有冰水混合物的器皿中，右手將搗桿垂直插入套管中，上下轉動研磨數十次（6～8分鐘），充分研碎，使組織勻漿化。
機器勻漿：用組織研磨機（OMNIBead Ruptor 24 多樣品研磨珠均質儀） 6m/s研磨制成10％組織勻漿，也可用內切式組織勻漿機制備(Omni Prep 多樣品均質儀 )勻漿時間20秒/次，間隙10秒，連續3-5次。
超聲粉碎：用超聲波細胞破碎儀(OMNI Sonic Ruptor400W)進行破碎，可用以振幅12.7mm超聲處理30秒使細胞破碎.
超聲粉碎：用超聲波細胞破碎儀(OMNI Sonic Ruptor400W)進行破碎，可用以振幅12.7mm超聲處理30秒使細胞破碎.
反復凍融：培養或者分離的細胞可以用以上的方法勻漿，也可以反復凍溶3次左右（即讓細胞加適量的低滲液或者雙蒸水放低溫冰箱中結冰，溶解，再結冰，再溶解，反復3次左右），但有部分酶活力會受影響。
取少量組織勻漿做涂片（直接涂片、染色均可），顯微鏡下觀察細胞是否磨破，若沒有破則可以延長勻漿時間或增加凍融次數。
取少量組織勻漿做涂片（直接涂片、染色均可），顯微鏡下觀察細胞是否磨破，若沒有破則可以延長勻漿時間或增加凍融次數。
4、將制備好的10％勻漿用普通離心機或低溫低速離心機3000r/min左右離心10～15分鐘，若檢測ATP酶，則只需要1000轉/分，離心5分鐘，將離心好的勻漿留下上清棄下面沉淀。
根據你的實驗需要，取適量上清夜進行各種測定。
根據你的實驗需要，取適量上清夜進行各種測定。