細胞系特征

細胞株名稱：NCI-H446 人小細胞肺癌細胞

種屬：人,男性

組織來源：肺癌；轉(zhuǎn)移灶：肋膜滲出癌；小細胞肺癌

生長特性：貼壁生長

形態(tài)特征：上皮細胞

微生物及支原體檢測：陰性

細胞背景：NCI-H446細胞株從一位小細胞肺癌患者的胸水中建立。 細胞的原始形態(tài)并不具有小細胞肺癌特征。 這個細胞株是小細胞肺癌的生化和形態(tài)學上的變種，表達神經(jīng)元*的烯醇酶和腦部肌酸激酶同功酶。 左旋多巴脫羧酶、蠶素、抗利尿激素、催產(chǎn)素或胃泌激素釋放肽未達到可檢測水平。

安全性：所有腫瘤和病毒轉(zhuǎn)染的細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需高壓滅菌后方能丟棄。

培養(yǎng)條件：

*培養(yǎng)基：90%RPMI-1640+10%胎牛血清

血清我們推薦用:

GIBCOFBS-10099-141或HYCLONEFBS-SH30084.03。

培養(yǎng)條件：37.0C carbon dioxide(CO2),5%

傳代方法：

收到細胞后，在倒置鏡下(是在4X物鏡)觀察整個細胞生長情況。

（一）如果細胞未長滿，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內(nèi)，嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶，吸出培養(yǎng)液，換 10ml新鮮培養(yǎng)液后繼續(xù)培養(yǎng)。

(二)如果細胞已長滿，即可進行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下：

1. 棄去培養(yǎng)液，用PBS（不含鈣,鎂離子）洗1-2次。

2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，倒放于37℃培養(yǎng)箱1-3分鐘預(yù)熱，之后翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶10-30秒，在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量*培養(yǎng)基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補加*培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出一半，分到新的培養(yǎng)瓶中。如果沒有特別說明，收到細胞后的*次傳代一般是一傳二。

注：1、觀察細胞在低倍鏡（4或5X物鏡)下進行，否則不能準確判斷細胞的傳代密度。看細胞的形態(tài)請在10X或20X物鏡下。

2、瓶中運輸培養(yǎng)基不能重復(fù)再用,請換用加雙抗的新培養(yǎng)基，細胞凍存后,培養(yǎng)基中可不加任何抗生素。

3、有些細胞貼壁不牢，如發(fā)現(xiàn)貼壁細胞有脫落，可離心吹打后接種到新瓶內(nèi)。

4、收到細胞后，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請及時與我們。

凍存方法：

凍存液：90%胎牛血清，10%DMSO

儲存：液氮儲存