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上海慧穎生物科技有限公司

K1人乳頭狀甲狀腺癌細胞株培養說明書

時間:2015-11-2閱讀:2341

                          K1人乳頭狀甲狀腺癌細胞株培養說明書

細胞特性

1)來源:甲狀腺癌

2)形態:上皮細胞樣

3)含量:>1x106 /mL

4)污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

5)規格:T75瓶或者1mL凍存管包裝

運輸和保存:使用含有胎牛血清的2ml凍存管發送存活細胞。收到細胞后,可在1000RPM,常溫條件下,離心5min后,于潔凈操作臺棄去上清,加入推薦使用的培養基后轉移至10cm培養皿或者T75培養瓶中培養,傳代達到細胞生長狀態良好時,再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。


細胞培養步驟

一.培養基及培養凍存條件準備:

1.準備DMEM/F12培養基(DMEM/F12:GIBCO,貨號10565-018)90%;胎牛血清,10%

2.培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5% 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%

3.凍存液:90%*培養基,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。

細胞處理:

1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養隔夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養基,培養隔夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。

1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。

3. 6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。

4. 將細胞懸液按1215的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

3)細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進行凍存。


注意事項:

1. 收到細胞后,若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們。

2. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。






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