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上海慧穎生物科技有限公司

3T3-L1細胞 @慧穎細胞庫 培養注意事項

時間:2016-2-27閱讀:3280

              3T3-L1細胞 @慧穎細胞庫 培養注意事項

有的老師在培養3T3-L1細胞中,發現都粘附著長在一起,平常狀態下看起來也會像長滿融合了一樣。慧穎技術人員對此總結了下3T3-L1細胞傳代步驟以及培養注意事項,僅供各位老師參考:

傳代步驟:

以用10 cm細胞培養皿培養的3T3-L1細胞為例:

    1)待培養皿中的細胞生長至密度為95-100%時,棄細胞培養基,并加入5ml 1×PBS輕晃洗滌一次;

  2)棄1×PBS,加入1ml胰酶,搖勻使所有的細胞均被胰酶覆蓋后37℃消化1~2min,顯微鏡下觀察到細胞變圓并從平皿上脫落下來即為消化*;

  3)加入3ml新鮮的DMEM培養基(含10%FBS,1%雙抗),終止胰酶消化,并將形成的細胞懸液吹打混勻;

  4)按實驗需要取細胞懸液接種到新的10 cm細胞培養皿內,并用DMEM培養基補足體積至10ml,按十字形的方式搖勻后,置于CO2培養箱37℃條件下繼續培養。

 

注意事項:

1)不要對細胞進行頻繁的傳代處理,傳代時,細胞密度已生長至85%以上;

  2)3T3-L1貼壁不是十分牢,禁止培養過程中頻繁地移動;

  3)消化時間不要超過兩分鐘,不要消化過頭,消化過程中,可以在顯微鏡下觀察,細胞變圓后,輕拍培養皿,如細胞可以呈流沙狀流動,即可立即終止消化;

  4)終止消化后,細胞輕輕吹打10~20次即可,不要太用力吹打或者吹打太多次,盡量減少機械傷害。

5)傳代時接種的細胞量不要太少,否則容易生長緩慢或者長不動,傳代比例1:3~1:8。

6)如細胞狀態還是比較差,可嘗試在細胞培養基中加入適量的丙銅酸鈉或谷氨酰胺(如1%)。

3T3-L1細胞慧穎細胞庫*,更多大禮包相送,更多詳情請致電我公司!

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