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東曹(上海)生物科技有限公司

氨基柱的活化相關說明

時間:2022-5-13 閱讀:5339
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氨基柱,全稱氨丙基鍵合硅膠色譜柱,色譜柱家族中較靈活的色譜柱,不僅可以用于正反相還可以應用于離子交換(弱陰離子交換柱)中。但是需要注意的是,氨基柱的鍵合官能團氨丙基要比C18,C8柱的鍵合官能團更容易水解,所以要特別注意控制pH值范圍,pH值越低越有發(fā)生水解的危險,流動相中水的比例越高當然也越有發(fā)生水解的危險(建議水比例不超過40%)。所以,在使用后以及準備長時間放置該柱時,必要的清洗和將氨基柱保存于純的有機溶劑中是很好的保養(yǎng)措施。
 
氨基柱的活化:
 
對于新氨基柱,首先應詳細閱讀使用說明書,了解柱子出廠保存溶劑。一般出廠會保存在正相溶劑中,如果保存溶劑與將要使用的流動相極性不同不互溶,先用異丙醇過渡。過渡過程中應注意異丙醇粘度較大,會導致柱壓很高,應使用小流速過渡。
 
當使用反相模式時,用前請使用異丙醇小流速過夜平衡色譜柱。流速建議0.1-0.2mL/min,之后再轉換到100%乙腈沖洗20柱體積,然后轉換到和流動相相同比例的不含鹽的乙腈水體系沖洗20柱體積。
 
當使用正相模式時,如與出廠保存溶劑互溶,可使用流動相直接沖洗20倍柱體積;如不互溶請用異丙醇過渡。
 
注意事項:
 
正相條件:正相使用時,不宜分析含醛基、羰基的化合物,不可用于還原糖的分析
反相條件:pH值越低越有發(fā)生水解的危險,所以要嚴格控制pH范圍,使其pH范圍在2.0~8.0,通常建議使用范圍:pH3.0~7.0比較合適;
流動相中水相比例越高越有發(fā)生水解的危險,所以應盡量減少水在氨基柱上的保留,建議水相使用比例
短時間內(nèi),氨基柱可保存在純甲醇,乙腈或異丙醇中,若長時間不使用建議保存在異丙醇和正己烷試劑 中封存。

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