化工儀器網技術文章
各種動物外周血中性粒細胞分離液試劑盒說明書
閱讀：1591 發布時間：2021-8-4各種動物外周血中性粒細胞分離液試劑盒
規格：200 mL/kit
保存：本產品對光敏感，應該室溫避光儲存，保質期 2 年。無菌開封后，保存于室溫。
試劑盒組成：
試劑A 200mL
試劑C 100mL
細胞洗滌液 200mL
紅細胞裂解液 100mL
操作步驟：
1. 取新鮮抗凝全血，血液體積小于5mL時，在離心管中先加入4mL試劑A，后將2mL試劑C小心疊
加于試劑A之上，形成梯度界面（血液體積大于等于5mL，試劑A與試劑C比例2：1，試劑總量與稀
釋后的樣本量相等。但二者的總體積不能超過離心管的三分之
二，否則會影響分離效果），將血液平鋪到分離液液面上方，
注意保持兩液面界面清晰。（可以使用巴氏德吸管吸取血液，
然后將血液小心的平鋪于分離液上，因為兩者的密度差異，將
形成明顯的分層界面。如果樣品較多，加樣的時間較長，在離
心之前出現紅細胞成團下沉屬正常現象。）
2. 室溫，水平轉子500~1000g，離心20~30min（血液的體積
越大所需的離心力越大，離心時間越長，最佳的分離條件需摸
索，離心轉速最大不超過1200g）。
3. 離心后，離心管中將出現兩層環狀乳白色細胞層，上層細
胞為單個核細胞層，下層細胞為中性粒細胞層，如圖所示（個
體差異或者是分離條件不同，粒細胞層可分離不明顯）。
4. 用吸管小心吸取試劑C與試劑A之間以及試劑A中的中性
粒細胞到15mL潔凈的離心管中，10mL PBS或細胞洗滌液洗滌
細胞。250g，離心10min（如有紅細胞混雜則加入適量紅細胞
裂解液）。
5. 棄上清，5mL的PBS或細胞清洗液重懸細胞，250g，離心
10min。
6. 重復步驟6
7. 棄上清，細胞重懸備用。
注意事項：
A. 開封前顛倒混勻，本分離液為無菌產品，為延長分離液保存時間，請在無菌條件下啟封，避免
微生物污染。。
B. 分離液使用時應始終保持室溫（18℃~25℃），如室內溫度較低，可將分離液預熱。4℃或者是
分離示意圖
血漿層
單個核細胞層
試劑 C
試劑 A
紅細胞層
中性粒細胞層
溫度較低的條件下離心，可能會導致白膜層中紅細胞污染加重。
C. 血液樣本最好為新鮮抗凝血（采血2 h以內），為保持淋巴細胞的活性，應避免冷凍和冷藏。
D. 血液樣本不需稀釋，直接進行分離即可。
E. 稀釋血液或洗滌細胞，不可使用含Ca、Mg離子的緩沖液及培養液，其成分會導致血細胞凝集，
大大降低細胞得率及純度。
F. 部分塑料制品（如聚苯乙烯）因其帶有的靜電作用，可能會導致細胞掛壁，影響分離效果。
G. 血液樣本的粘稠度或者是溫度差異，可能會影響分離效果，可以調節離心轉數和離心時間，摸
索最佳的分離條件。
H. 如果要進一步對分離的細胞進行培養，那在收集血液和分離過程中，注意無菌操作，避免微生
物污染。
I. 不同動物血液在不同比重分離液中的細胞離散系數及細胞帶電不同，用戶在制定分離液時應提
供所需分離液的比重、動物種屬及被分離細胞的名稱。