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        ELISA試劑盒間接法之所以能成功關鍵點是純度和抗原。雖然有些時候使用粗提抗原包被也能夠獲取實際有效的檢測結果，但是應該盡量給予純化，這樣一來就可以提高ELISA試驗的特異性。

 

        特別要注意的是除了能與普通健康人血清產生反應的雜質，比如以腸埃希氏菌作為工程酶的重組抗原，又比如其中含有腸埃希氏菌的成份，極有可能和受過腸埃希氏菌感染者血清中的抗腸埃希氏菌抗體之間產生反應。

 

        與酶標抗人Ig反應的物質也可以在抗原中，如果抗原來源于人血漿或者是人體組織，假設您不將其中的Ig抹去，試驗的過程中也會發生假陽性的一系列反應。還有就是如果有包含無關蛋白的抗原，也會因為竟爭吸附導致包被效果的不準確。

 

        普通血清中所含的高濃度的非特異性抗體是簡介法中的另一種干擾因素。在病人血清中受檢的特異性血清中免疫球蛋白主成分只占總IgG中的小部分。

 

        血清中免疫球蛋白主成分的吸附性很強，非特異血清中免疫球蛋白主成分可直接吸附到固相載體上，也可吸附到包被抗原的表面。所以在間接法中抗原包被后一般用無關蛋白質（例如BSA）再包被一次，以封閉堵塞固相上的空余縫隙。還有在檢測的過程中標本必須先金星稀釋，用于避免過高的陰性本底導致判斷結果的偏差！

 

        ELISA試劑盒加底物顯色這種方法主要是對病原體抗體的檢測而進行傳染病的診斷。間接法的優勢是只需要變動包被 抗原就可以用同一酶標抗抗體檢測相應抗體的方法。