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技術文章

動物細胞衰老特異性β-半乳糖苷酶活性高質敏感比色法定量檢測

閱讀:1193          發布時間:2016-6-30

主要用途

        我公司動物細胞衰老特異性β-半乳糖苷酶活性高質敏感比色法定量檢測試劑是一種旨在使用化學方法,快速有效地裂解動物細胞,通過高速離心,獲得澄清細胞裂解懸液,在β-半乳糖苷酶反應體系里,以氯苯胺紅 -β-D- 吡喃半乳糖苷為棕黃色底物,水解所產生的暗紅色的氯苯胺紅,即采用比色法定量測定細胞裂解懸液制備樣品中的低表達β-半乳糖苷酶活性藉此評價作為細胞復制性衰老(replicative senescence)的分子特征來探測衰老狀況的而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。廣泛應用于細胞生物學研究。其適用于各種人體和動物細胞裂解懸液等樣品衰老細胞內源性半乳糖苷酶活性分析。產品即到即用,性能穩定,參數優化,操作簡便、高度敏感。

注意事項

  • 本產品為20次(比色皿)和80次(96孔板)操作
  • 本產品的各項參數達到優化
  • 建議操作時,注意避光
  • 操作時,須戴手套
  • 反應液(Reagent D)嚴格避免光照和反復凍融
  • 用戶可以根據需求按比例調整試劑用量進行樣品制備
  • 用戶可以測定細胞裂解懸液的蛋白濃度,便于計算活性單位之需;建議使用 Bradford蛋白質濃度定量檢測試劑盒(30030.1)
  • 如果用戶需要測定背景空對照,可以*按照活性檢測的操作步驟進行,*變化在于100微升樣品改成100微升裂解液(Reagent B)替代
  • 如果用戶測得背景空對照,計算活性時,勿忘(樣品吸光讀數-背景空對照讀數)
  • 反應孵育時間的理想范圍為10分鐘至30分鐘內出現暗紅色顯色:低于5分鐘表明酶活性過高,建議稀釋樣品,否則影響檢測精度
  • 如果樣品的酶活性過低,可以增加孵育時間至72小時
  • 樣品的酶活性吸光值在0.1至1.2 OD單位為理想狀態,其酶活性與吸光值成線性正相關;吸光值在0.3至0.9 OD單位為狀態
  • 反應終止后,即刻進行比色測定
  • 比色測定后,比色皿須清洗*
  • 酶活性單位濃度定義:在37℃溫度下,pH6.0的條件下,每單位酶在單位時間內(每分鐘)水解1微摩爾的氯苯胺紅 -β-D- 吡喃半乳糖苷
  • 本公司提供系列β-半乳糖苷酶檢測試劑產品
  • 如:
  •    動物組織衰老特異性β-半乳糖苷酶活性高質敏感比色法定量檢測試劑盒

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