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如何8小時內(nèi)在單塊孔板中篩選上百萬個B細胞？
抗體是理想的治療性生物大分子，不但能與各種靶點結(jié)合，且具有高親和力和特異性。隨著雜交瘤和噬菌體展示技術(shù)的創(chuàng)新，藥物研發(fā)人員能夠利用抗體的天然多樣性，廣泛使用單克隆抗體（mAbs）治療癌癥、慢性炎癥和傳染病。
作為抗體開發(fā)上游的關(guān)鍵技術(shù)環(huán)節(jié)，單B 細胞篩選技術(shù)已經(jīng)有了顯著發(fā)展，并成為獲取抗原特異性mAb 序列的主要來源。然而，這一技術(shù)仍然面臨諸多挑戰(zhàn)，如：開發(fā)效率低、成本高昂等問題。
只需一臺Incucyte®實時活細胞分析系統(tǒng)，結(jié)合CellTraxx 軟件便可自動對細胞的運動和形態(tài)進行高通量、實時的無標記追蹤，輕松為每一個細胞都裝上“GPS”，讓您的研究跳脫傳統(tǒng)束縛，邁入高效率的新時代。
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高效可靠的新型單細胞分離技術(shù)
基于納米孔陣列和圖像驗證的高通量克隆篩選（HT-NIC）技術(shù)基于CellCelector納米孔板，每個大孔底部都有多達數(shù)十萬個納米孔，能夠有效地對成千上萬個單細胞進行分離，同時確保細胞被相同的培養(yǎng)基覆蓋，因此可以共享生長因子，在共培養(yǎng)環(huán)境下更容易生長至克隆。
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全面加速的B細胞篩選流程
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靈活經(jīng)濟的B細胞篩選方案
CellCelector支持明場、相差以及藍色、綠色、紅色、遠紅外和近紅外熒光通道成像以進行分泌物多重分析。對納米孔板中的單個細胞進行單細胞分泌分析，能夠快速識別理想的分泌細胞。CellCelector B細胞工作流程支持多種細胞分析策略，包括使用抗原包被孔板、加入微球或抗原表達報告細胞的分析策略。
圖1. CellCelector B細胞工作流程和基于納米孔的分泌測定示意圖
CellCelector B細胞篩選可使用H100型（六邊形）納米孔板，每個大孔包含60,000個納米孔，且具有無細胞毒性和低黏附性的特點，防止細胞附著，不受細胞的粘附性或懸浮條件優(yōu)化的影響，可有效分離單個B細胞并進行分泌物檢測。
圖2. H100六邊形納米孔板
圖3. 孔板內(nèi)包被抗原的B 細胞分泌分析方案
圖4. 微球和報告細胞的單B 細胞篩選方案
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可視化篩選和挑取過程
使用CellCelector 分離和表征原代B細胞。使用明場和熒光掃描52,000個納米孔，鑒定含有分泌抗體（AF647+）的B細胞且對EGFR結(jié)合呈陽性（AF488+）的B細胞納米孔。（A）熒光特異性647nm發(fā)射的圖像（紅色）；含有抗體分泌細胞的兩個鄰近孔可以觀察到三個紅色熒光孔，表示它們分泌了目標抗體（ASC）。（B）熒光特異性488nm發(fā)射的圖像（綠色）；一個含有EGFR特異性ASC的鄰近孔兩個綠色的孔代表其分泌物能夠和EGFR結(jié)合。（C）來自647和488nm通道的圖像疊加和（D）用于挑取EGFR+ASC的明場圖像。從納米孔挑取EGFR+ASC之前和之后的明場圖像（E）和（F）挑取前后的明場圖像顯示納米孔內(nèi)所有的內(nèi)容物均已挑取。
圖5. 細胞分泌分析示例[1]
總結(jié)
傳統(tǒng)B細胞篩選 | CellCelector B細胞篩選 |
費時費力、效率低下且成本高昂 | 使用自動化分析和分離流程，僅需一塊納米孔板即可實現(xiàn)上萬個單B細胞篩選，高效且節(jié)約 |
需要引入多種分析工具篩選單B細胞，并評估B細胞性能和產(chǎn)量 | 基于HT-NIC方法，在單次分析流程中即可對B細胞分泌物特異性及產(chǎn)量進行評估，并有效回收分離 |
操作復(fù)雜，需要專業(yè)操作人員 | 高度集成的自動化流程減少人力投入，操作簡便
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提高臨床和生物治療研究及
抗體開發(fā)中 B 細胞工作流程的效率
下載文檔
-參考文獻-
[1] Matacho et al. (2022). Antibody Therapeutics, Volume 5, Issue 1, January 2022, Pages 11–17